[發明專利]一種抑制潛在致病菌的植物甾醇復合制劑及其應用

在審

• 申請號: 202210992368.5
• 申請日: 2022-08-18
• 公開（公告）號: CN116059326A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 呂東海;成艷芬;唐志剛
• 申請（專利權）人: 南京諾齊生物科技有限公司
• 主分類號: A61K38/47
• 分類號: A61K38/47;A61K31/575;A61P31/04;A61P31/10;A61P1/00;C12N9/42
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發明公開了一種抑制潛在致病菌的植物甾醇復合制劑及其應用。所述植物甾醇復合制劑是以植物甾醇和內切葡聚糖酶酶液1:1～3的體積比制備得到的，其中內切葡聚糖酶酶液是由氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示的內切葡聚糖酶突變體TrepCel3?Aa制備得到的。所述植物甾醇復合制劑的制備工藝簡單，經實驗證實，其具有明顯的抑制動物體內潛在致病菌的作用，例如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌，且是通過抑制潛在致病菌菌膜形成達到抑菌作用的，而且其還能夠有效減少毒力因子彈性蛋白酶、綠膿菌素、胞外多糖和Swarming的含量，進而促進動物的腸道健康，有助于動物的生長。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，具體涉及一種抑制潛在致病菌的植物甾醇復合制劑及其應用。

背景技術

植物固醇，是以游離狀態或與脂肪酸和糖等結合的狀態存在的一種功能性成分，廣泛存在于蔬菜、水果等各種植物的細胞膜中，其對人體健康有很多益處，有防治前列腺肥大、抑制腫瘤、抑制乳腺增生和調節免疫等作用，還可以與膽固醇競爭，減少膽固醇吸收。植物甾醇也是一種抑菌劑，通過改變細胞通透性發揮抑制某些細菌的生長。

隨著宏基因組篩選方法的廣泛運用，目前已有多種內切葡聚糖酶從草食動物的瘤胃中獲得，如駝鹿、綿羊、水牛、奶牛和駱駝。但是大部分候選纖維素酶沒有被克隆和表征。內切葡聚糖酶通過底物結合口袋與底物錨定，進一步被活性催化位點催化。因此，挖掘瘤胃微生物宏基因組中內切葡聚糖酶可以為內切葡聚糖酶的開發提供新的研究思路，同時對底物結合口袋進行適當的定點突變，提高酶與底物結合穩定性。

動物體內存在一些潛在致病菌，能夠影響其腸道健康，進而導致動物的生長受阻，不利于畜牧業的發展。而抗生素的使用也使動物體內的致病菌產生抗藥性，因此，能夠抑制潛在致病菌、保障動物腸道健康，并長久使用的制劑對畜牧業的發展具有重要的意義。

發明內容

本發明提供了一種抑制潛在致病菌的植物甾醇復合制劑及其應用。所述植物甾醇復合制劑具有很好的潛在致病菌抑制作用，能夠保障動物腸道健康。

為了實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明提供了一種抑制潛在致病菌的植物甾醇復合制劑，所述植物甾醇復合制劑中含有植物甾醇和內切葡聚糖酶酶液。

進一步的，所述植物甾醇和內切葡聚糖酶酶液的體積比為1:1～3。

進一步的，所述內切葡聚糖酶酶液是由氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示的內切葡聚糖酶突變體TrepCel3-Aa制備得到的。

進一步的，所述內切葡聚糖酶突變體TrepCel3-Aa是由氨基酸序列為SEQ?ID?No.1的內切葡聚糖酶的第124位的纈氨酸突變為色氨酸以及第128位的絲氨酸突變為酪氨酸獲得的。

進一步的，所述內切葡聚糖酶酶液的酶活不低于500U/mL。

本發明還提供了所述的植物甾醇復合制劑在制備潛在致病菌的抑菌劑中的應用。

進一步的，所述植物甾醇復合制劑的使用濃度不低于10ug/ml。

進一步的，所述潛在致病菌包括金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌。

進一步的，所述植物甾醇復合制劑能夠有效減少潛在致病菌的毒力因子彈性蛋白酶、綠膿菌素、胞外多糖和Swarming的含量。

進一步的，所述植物甾醇復合制劑能夠有效抑制潛在致病菌菌膜形成。

與現有技術相比，本發明的優點和有益技術效果是：

1、本發明對內切葡聚糖酶的底物結合口袋中的活性位點進行定點突變，將得到內切葡聚糖酶突變體TrepCel3-Aa在大腸桿菌中成功表達，并將其純化得到的突變體酶液與植物甾醇復配，得到植物甾醇復合制劑。