[發明專利]獲得造血干/祖細胞的培養基及培養方法和用途

有效

• 申請號: 202210986002.7
• 申請日: 2022-08-16
• 公開（公告）號: CN115354026B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 覃金華;李艷華;裴雪濤;林小松;姜佳楠;張博文;何麗娟
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 于騰昊

本發明涉及細胞工程領域，具體涉及獲得造血干/祖細胞的培養基及培養方法和用途。本發明提供一種獲取造血干/祖細胞的培養基體系，包括：第一階段誘導培養基和第二階段誘導培養基，所述第一階段誘導培養基含有Bix01294、RG108、PD0325901和VPA；所述第二階段誘導培養基含有Bix01294和VPA。本發明通過篩選能夠誘導成紅細胞重編程為造血干/祖細胞的小分子化合物，獲得特殊組成的培養基體系，以非轉錄因子依賴的方式實現紅系細胞向造血干/祖細胞的重編程。

技術領域

本發明涉及細胞工程領域，具體涉及獲得造血干/祖細胞的培養基及培養方法和用途。

背景技術

造血系統失調會導致許多疾病，諸如貧血、白血病、淋巴瘤和血小板減少癥。目前，造血干/祖細胞移植和造血細胞輸注是治療這些血液病的有效方法，例如地中海貧血和白血病等。然而，傳統造血干/祖細胞來源——如臍帶血、骨髓和外周血，由于可移植細胞數量有限以及難以高效擴增，導致傳統來源的造血干/祖細胞移植治療常受困于細胞來源短缺的難。因此，通過再生醫學技術找到造血干/祖細胞的新來源有很大的應用前景。

目前獲取造血干/祖細胞的方法主要包括:(1)利用誘導分化技術將人多能干細胞定向誘導分化為造血干/祖細胞；(2)利用細胞譜系重編程技術將成體細胞直接去分化為造血干/祖細胞。然而，利用多能干細胞獲取造血干/祖細胞在應用時存在致瘤風險。誘導重編程的方式依賴于病毒介導的轉錄因子，這種對基因進行操作的方式帶來安全性隱患，限制了將來的臨床轉化。

因此，亟需開發一種更為安全的以非轉錄因子依賴的方式實現紅系細胞向造血干/祖細胞的重編程的方法。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。本發明提供一種獲取造血干/祖細胞的培養基體系，包括第一階段誘導培養基和第二階段誘導培養基，本發明通過篩選能夠誘導成紅細胞重編程為造血干/祖細胞的小分子化合物，獲得特殊組成的培養基體系，以非轉錄因子依賴的方式實現紅系細胞向造血干/祖細胞的重編程。本發明第一方面提供一種獲取造血干/祖細胞的培養基體系。根據本發明的一個實施方案，所述培養基體系包括：

第一階段誘導培養基和第二階段誘導培養基，

所述第一階段誘導培養基含有Bix01294、RG108、PD0325901和VPA；

所述第二階段誘導培養基含有Bix01294和VPA。

現有的獲取造血干/祖細胞的方式，存在較大的安全隱患。例如，利用多能干細胞獲取造血干/祖細胞在應用時存在致瘤風險；誘導重編程的方式依賴于病毒介導的轉錄因子，這種對基因進行操作的方式帶來安全性隱患，限制了將來的臨床轉化。發明人通過在大量的利于誘導分化的小分子化合物中篩選獲得上述特定組成的培養基組分，通過篩選能夠誘導成紅細胞重編程為造血干/祖細胞的小分子化合物，獲得特殊組成的培養基體系，以非轉錄因子依賴的方式實現紅系細胞向造血干/祖細胞的重編程。

根據本發明的一個實施方案，所述第一階段誘導培養基中，所述Bix01294的濃度為0.3-0.7μM。

根據本發明的一個實施方案，所述第一階段誘導培養基中，所述RG108的濃度為0.02-0.07μM。

根據本發明的一個實施方案，所述第一階段誘導培養基中，所述PD0325901的濃度為0.2-0.7μM。

根據本發明的一個實施方案，所述第一階段誘導培養基中，所述VPA的濃度為0.1-0.3mM。

根據本發明的一個實施方案，所述第二階段誘導培養基中，所述Bix01294的濃度為0.3-0.7μM。

根據本發明的一個實施方案，所述第二階段誘導培養基中，所述VPA的濃度為0.1-0.3mM。