[發明專利]MCOLN2在結直腸癌中的應用

有效

• 申請號: 202210981199.5
• 申請日: 2022-08-16
• 公開（公告）號: CN115287359B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 孟祥祺;余洪燕
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第六醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 廣州幫專高智知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 44674
• 代理人: 顏德昊

本發明公開了MCOLN2在結直腸癌中的應用。利用腫瘤公共數據庫進行生物信息學分析和臨床組織樣本表達檢測發現，相較于正常組織，MCOLN2的表達在結直腸腫瘤組織中顯著降低。并且在結直腸癌細胞中過表達MCOLN2可以顯著抑制結直腸癌細胞的增殖能力。以上結果提示MCOLN2低表達與結直腸癌的進展密切相關，并可能在其中扮演關鍵角色。

技術領域

本發明涉及MCOLN2在結直腸癌中的應用。

背景技術

結直腸癌(colorectalcancer,CRC)是最常見的人類惡性腫瘤之一，隨著我國逐步進入人口老齡化，CRC的發病率逐年增加，其致死率也高居腫瘤致死率的前五位。雖然CRC疾病研究取得了不少成果，但是多數患者就診時已為晚期，喪失了治愈的最佳時機。因此深入研究發病機制、探尋新的治療靶點并實施個體化治療是CRC研究中的新挑戰，也是制定CRC精準治療策略的關鍵。

MCOLN家族與腫瘤發生發展密切相關。與MCOLN1和MCOLN3不同，目前的研究發現MCOLN2大部分表達在淋巴細胞和骨髓細胞中，主要參與病毒或者細菌侵入體內所引起的先天免疫反應。有文獻報道，敲低MCOLN2的表達，可以抑制AKT-ERK1/2磷酸化所誘導的神經膠質瘤細胞凋亡，進而抑制神經膠質瘤的生長。然而，MCOLN家族在結直腸癌中的研究，至今未見報道。

發明內容

我們前期研究發現溶酶體離子通道蛋白MCOLN2在結直腸癌中表達降低，且過表達MCOLN2可以顯著抑制結直腸癌細胞的細胞活力和克隆形成能力；同時轉錄組測序發現ERstress信號通路與MCOLN2密切相關，上調MCOLN2可以有效抑制ER?stress信號通路相關分子ATF4的蛋白表達。此外，在MCOLN2過表達的細胞系中過表達ATF4可以挽救MCOLN2所引起的細胞活力降低。據此，我們提出假說MCOLN2通過抑制ATF4的表達，調控ER?stress信號通路，進而抑制結直腸癌細胞的增殖。我們將綜合應用質譜分析、免疫共沉淀等實驗方法，在細胞、實驗動物以及臨床標本等層面，多維度探討MCOLN2抑制結直腸癌進展的分子機制，為結直腸癌診療提供新的靶標和思路。

在本項目中，我們利用結直腸癌公共數據庫分析MCOLN2表達與患者預后、以及臨床病理參數的相關性。進一步在細胞水平探索敲低或者過表達MCOLN2對結直腸癌細胞的活力、細胞周期、凋亡以及對下游信號通路的調控，及介導結直腸癌進展的具體機制。最后擬利用裸鼠皮下成瘤模型，探索和確證MCOLN2抑制結直腸癌增殖的分子機制。本項目的順利實施，為探索結直腸癌臨床治療策略提供新的思路和靶點。

結直腸癌公共數據庫生物信息學分析發現，相較于正常組織，MCOLN2的表達在結直腸腫瘤組織中顯著降低，此結果在12對結直腸癌和正常結直腸組織中得到驗證。且在結直腸癌細胞中過表達MCOLN2可以顯著抑制結直腸癌細胞株的增殖能力。以上結果提示MCOLN2低表達與結直腸癌的進展密切相關，并可能在其中可能扮演關鍵角色。

附圖說明

圖1為qPCR檢測MCOLN2在12對配對結直腸腫瘤和正常組織中mRNA的表達水平圖；

圖2為qPCR檢測MCOLN2在結直腸癌細胞系中mRNA的表達水平圖；

圖3：A.westernblot檢測SW480過表達MCOLN2質粒后MCOLN2蛋白表達水平；B.SW480過表達MCOLN2后克隆形成能力；C.CCK8檢測SW480過表達MCOLN2后細胞活力；D.westernblot檢測在RKO細胞中siRNA敲低MCOLN2后MCOLN2蛋白表達水平；E.CCK8檢測RKO敲低MCOLN2后細胞活力；F.RKO敲低MCOLN2后克隆形成能力；

圖4：A.KEGG通路分析；B.MCOLN2和ATF4在結直腸癌細胞和結直腸正常細胞中的內源蛋白表達水平；C.westernblot檢測SW480過表達MCOLN2后ATF4的表達水平；D.CCK8檢測過表達MCOLN2的SW480上調ATF4的表達可以有效恢復細胞活力。