[發(fā)明專利]檢測不同呼吸道病原體的組合物、方法及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210980390.8
• 申請日: 2022-08-16
• 公開（公告）號: CN116064935A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 萬旺;龔凱軍;肖思遠(yuǎn);劉傳;陳曉亮;任小梅;劉佳;戴立忠
• 申請（專利權(quán)）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京派特恩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11270
• 代理人: 吳薇薇;徐川

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，具體地，涉及檢測不同呼吸道病原體的組合物，更具體地，涉及檢測副流感病毒2型(HPIV2)、副流感病毒4型(HPIV4)以及腮腺炎病毒的組合物。與此同時，還提供了包含所述組合物的試劑盒，所述組合物的用途，以及用于檢測不同呼吸道病毒的方法。本發(fā)明提供組合物在單管反應(yīng)體系中同時實(shí)現(xiàn)HPIV2、HPIV4，和腮腺炎病毒的檢測。使得不同毒株能夠得到區(qū)別對待，從而使得治療和預(yù)防更效率。同時，本發(fā)明的組合物，其檢測的靈敏度更高，達(dá)到100拷貝/mL，檢測更為準(zhǔn)確，針對易漏檢的HPIV4設(shè)計兩套引物和探針防止漏檢。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，具體地，涉及檢測不同呼吸道病原體的組合物，更具體地，涉及檢測副流感病毒2型(HPIV2)、副流感病毒4型(HPIV4)以及腮腺炎病毒的組合物。

背景技術(shù)

人副流感病毒(human?parainfluenza?virus，HPIV)屬副粘病毒科，為負(fù)性單鏈RNA病毒，是常見的社區(qū)獲得性呼吸道感染病原，因其諸多特性與流感病毒不同，且又陸續(xù)分離得到其他病毒株，故被命名為副流感病毒。HPIV可分為兩大類：呼吸道病毒屬(HPIV1和HPIV3)及腮腺炎病毒屬(HPIV2和HPIV4)。各型病毒主要結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特征相似，但流行病學(xué)和所引發(fā)疾病的臨床特征有差異。HPIV廣泛存在于自然界，所致疾病的發(fā)病率僅次于呼吸道合胞病毒(Respiratory?syncytial?virus，RSV)，血清學(xué)調(diào)查顯示絕大多數(shù)6～10歲兒童曾感染過HPIV，目前它已成為可導(dǎo)致最沉重疾病負(fù)擔(dān)及影響經(jīng)濟(jì)的病毒之一。

HPIV2在非免疫抑制或無合并慢性病的兒童，喉氣管支氣管炎是最常見的疾病。HPIV4由于感染癥狀輕微，因此并未引起人們足夠的重視，但近年有血清學(xué)流調(diào)資料顯示，在所有呼吸道感染患者中HPIV4抗體陽性約占3％，而兒童和青少年卻高達(dá)50-90％。腮腺炎病毒(mumps?virus)屬副粘病毒科，為負(fù)性單鏈RNA病毒。人是腮腺炎病毒惟一宿主，病毒經(jīng)飛沫傳播，易感者為學(xué)齡期兒童，好發(fā)于冬春季節(jié)。本病潛伏期約2～3周，病毒侵入呼吸道上皮細(xì)胞和局部淋巴結(jié)內(nèi)增殖后，能引起腮腺、舌下腺、顎下腺腫大、頭痛、發(fā)燒，并能引起多種并發(fā)癥。

因此，HPIV2、HPIV4，和腮腺炎病毒成為兒童較易感染的病毒，且由于感染之后癥狀相似，本領(lǐng)域需求一種能夠檢測這些病毒病的組合物，使得不同病毒能夠得到區(qū)別對待，從而使得治療和預(yù)防更效率，并且靈敏度高，特異性好，操作簡單，成本低。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，第一方面，本發(fā)明提供一種檢測不同呼吸道病原體的組合物，其特征在于，所述組合物包括：

如SEQ?ID?NO:1～3所示的檢測HPIV2的上下游引物及探針；

如SEQ?ID?NO:4～6所示的檢測HPIV4的上下游引物及探針；以及

如SEQ?ID?NO:10～12所示的檢測腮腺炎病毒的上下游引物及探針。

進(jìn)一步地，所述組合物包括：如SEQ?ID?NO:7～9所示的檢測HPIV4的上下游引物及探針。

本發(fā)明提供的檢測呼吸道病原體的組合物，主要利用多重?zé)晒釶CR分析方法，通過檢測呼吸道病原體上的不同的位點(diǎn)，對不同呼吸道病原體進(jìn)行檢測，從而在單管反應(yīng)體系中同時實(shí)現(xiàn)HPIV2、HPIV4，和腮腺炎病毒的檢測。使得不同毒株能夠得到區(qū)別對待，從而使得治療和預(yù)防更效率。同時，本發(fā)明的組合物，其檢測的靈敏度更高，達(dá)到100拷貝/mL，檢測更為準(zhǔn)確，針對易漏檢的HPIV4設(shè)計兩套引物和探針防止漏檢。

進(jìn)一步地，所述組合物包括：檢測內(nèi)標(biāo)的上下游引物及探針。

在一些具體的實(shí)施方案中，內(nèi)標(biāo)是人源內(nèi)標(biāo)基因。在一個具體的實(shí)施方案中，內(nèi)標(biāo)是人管家基因。