[發明專利]一種腸道微生物增強調節性B細胞對心臟移植排斥反應治療作用的方法

在審

• 申請號: 202210975170.6
• 申請日: 2022-08-17
• 公開（公告）號: CN115317518A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 王迪民
• 申請（專利權）人: 杭州錦賽生物醫學科技有限公司
• 主分類號: A61K35/17
• 分類號: A61K35/17;A61K35/24;A61K45/06;A61P37/06
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調節性B細胞(Breg)和腸道微生物治療能延長心臟移植受體小鼠的存活時間，防止心臟移植排斥反應，且腸道微生物能增強Breg對心臟移植排斥反應的保護作用。本發明通過構建同種異體心臟移植小鼠模型，發現靜脈注射脾臟分離的Breg和灌胃補充供體腸道微生物這兩種方式均能顯著延長心臟移植受體小鼠的存活時間。Breg通過減少IFN?γ⁺IL?2⁺CD4⁺T細胞和增加CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺T細胞誘導移植耐受，供體腸道微生物和Breg共同治療效果明顯優于Breg單獨治療。本發明提供了一種治療心臟移植免疫排斥的新方法，發明成果具有實際應用價值。

技術領域

本發明涉及心臟移植的術后治療，包括免疫細胞治療和腸道微生物治療，且腸道微生物治療能增強調節性B細胞(Breg)的治療作用。

背景技術

同種異體心臟移植是有效挽救終末期心臟病患者生命的一種手術方式，但移植后排斥反應嚴重影響了患者的存活時間。目前心臟移植后的免疫抑制藥物治療手段存在多種并發癥，免疫抑制不足也會發生排斥反應。

Breg是B淋巴細胞的亞群，脾臟CD19⁺CD5⁺CD1d^highBreg能夠調節免疫和抑制炎癥，具有免疫抑制功能。Breg通過誘導調節性T細胞(Treg)促進免疫耐受，抑制免疫排斥反應。

腸道微生物能促進宿主免疫系統發育和維持免疫平衡，健康的成年人具有穩定且相似的腸道微生物組成。疾病、飲食、抗生素等多種因素能引起腸道微生物組成或多樣性改變，進一步影響宿主免疫。皮膚移植供體和受體在移植前通過廣譜抗生素預處理調節微生物組成，可延長皮膚移植的存活時間。在腎移植中，供體腸道微生物有助于延長移植物存活時間。

然而，目前安全有效治療心臟移植排斥反應的方式不足，Breg治療和腸道微生物治療是潛在的臨床治療手段。

發明內容

針對心臟移植排斥反應治療技術的不足，本發明的目的之一在于提供一種安全有效治療心臟移植排斥反應的技術。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

S1構建心臟移植小鼠模型。

S2從心臟移植受體小鼠脾臟中分離Breg和非Breg B細胞。

S3心臟移植受體小鼠移植前靜脈注射分離的Breg和非Breg B細胞。

S4流式細胞術檢測促進心臟移植排斥反應的FN-γ⁺IL-2⁺CD4⁺ T細胞和促進心臟移植免疫耐受的CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ T細胞。

S5收集心臟移植供體小鼠和非供體小鼠的糞便，用PBS制備成糞便懸浮液。

S6心臟移植受體小鼠移植前取糞便懸浮液上清液以灌胃方式補充心臟移植供體小鼠和非供體小鼠的糞便微生物。

S7心臟移植受體小鼠移植前靜脈注射Breg和灌胃補充糞便微生物聯合治療。

S8記錄心臟移植受體小鼠的生存周期。

S2所述Breg的分離包括使用B220、CD1d、CD3、CD4、CD5和CD19抗體對細胞進行標記，以及使用流式細胞儀分選細胞和Flow Jo軟件分析。