[發明專利]一種檢測灰葡萄孢菌的琥珀酸脫氫酶B亞基點突變類型的引物組、試劑盒和方法

在審

• 申請號: 202210968157.8
• 申請日: 2022-08-12
• 公開（公告）號: CN115786560A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 曾蓉;戴富明;高萍;徐麗慧;高士剛;宋志偉;紀聞婕
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 上海開祺知識產權代理有限公司 31114
• 代理人: 費開逵

1.一種檢測灰葡萄孢菌的琥珀酸脫氫酶B亞基點突變類型的引物組，其特征在于，所述引物組包括如下引物組合中的一種或多種：引物組合1、引物組合2和引物組合3；其中，

引物組合1包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物；

引物組合2包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的引物；

引物組合3包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的引物。

2.一種檢測灰霉病菌對啶酰菌胺抗性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括根據權利要求1所述的引物組。

3.一種檢測灰葡萄孢菌的琥珀酸脫氫酶B亞基點突變類型的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟中的任意一個步驟：

S1：使用引物組合1對待測樣品進行PCR，PCR產物用Scr FI進行酶切；

S2：使用引物組合2對待測樣品進行PCR，PCR產物用Bam HI進行酶切；以及

S3：使用引物組合3對待測樣品進行PCR，PCR產物用Dra III進行酶切；

其中，引物組合1包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物；

引物組合2包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的引物；

引物組合3包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的引物。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟S1，S2，S3中，進行PCR時，退火溫度設置為58-60℃。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，在步驟S1，S2，S3中，進行PCR時，循環數設置為30-35個循環。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟S1，S2，S3中，使用引物組合1、2、3進行PCR的程序包括：變性：95℃、20s，退火：58℃、20s，延伸：72℃、20s，30個循環；在步驟S1，S2，S3中，使用引物組合1，2，3的PCR產物的酶切程序包括：37℃、10min，失活65℃、5min。