[發明專利]一種纖連蛋白和膠原蛋白的融合蛋白及其制備方法在審
| 申請號： | 202210962053.6 | 申請日： | 2022-08-11 |
| 公開（公告）號： | CN116003623A | 公開（公告）日： | 2023-04-25 |
| 發明（設計）人： | 魏文培;喬莎;郝東;趙碩文;李敏;侯增淼 | 申請（專利權）人： | 西安德諾海思醫療科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;C12N15/66;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/36;A61K8/64;A61K8/65;A61Q19/00;C12R1/84 |
| 代理公司： | 深圳市精英專利事務所 44242 | 代理人： | 李瑩 |
| 地址： | 710000 陜西省西安市灃東新城科源三路1*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蛋白 膠原 融合 及其 制備 方法 | ||
1.一種纖連蛋白和膠原蛋白的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。
2.根據權利要求1所述的纖連蛋白和膠原蛋白的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白包括如下氨基酸肽段：
纖連蛋白肽段，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；
膠原蛋白肽段，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。
3.根據權利要求2所述的纖連蛋白和膠原蛋白的融合蛋白，其特征在于：還包括連接肽肽段，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.3所示。
4.一種纖連蛋白和膠原蛋白的融合蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
A.設計目的基因；
B.構建pPIC9k-Fn-HLC重組質粒；
C.pPIC9k-Fn-HLC重組質粒轉化GS115酵母感受態；
D.GS115/pPIC9k-Fn-HLC酵母轉化子的鑒定及表達；
E.融合蛋白的發酵及純化。
5.根據權利要求4所述的纖連蛋白和膠原蛋白的融合蛋白的制備方法，其特征在于：所述目的基因為SEQ.ID.NO.5所示的核酸序列。
6.根據權利要求4所述的纖連蛋白和膠原蛋白的融合蛋白的制備方法，其特征在于：所述步驟B中，利用XhoI和NotI限制性內切酶對人工合成的序列及畢赤酵母通用載體進行雙酶切，酶切后回收對應的目的基因及載體，利用T4DNA連接酶連接轉化大腸桿菌，再測序后獲得pPIC9k-Fn-HLC重組質粒。
7.根據權利要求4所述的纖連蛋白和膠原蛋白的融合蛋白的制備方法，其特征在于：所述步驟C中，利用SaLI線性化pPIC9k-Fn-HLC重組質粒后對其進行純化回收，將pPIC9k-Fn-HLC重組質粒電轉化至畢赤酵母GS115，G418篩選高拷貝轉化子。
8.一種核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含權利要求1-3任意一項所述的纖連蛋白和膠原蛋白融合蛋白的核苷酸序列或其互補序列。
9.一種載體，其特征在于：含有權利要求8所述的核酸分子。
10.如權利要求1-3任意一項所述的融合蛋白在化妝品或醫美產品中的應用。
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