[發明專利]一種增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法

在審

• 申請號: 202210961986.3
• 申請日: 2022-08-11
• 公開（公告）號: CN115287300A
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 王龍;姚蕓;王猛
• 申請（專利權）人: 無錫多寧生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;C12N5/071
• 代理公司: 上海點威知識產權代理有限公司 31326
• 代理人: 許曉琳

1.一種增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法，其特征在于：通過ExpiCHO細胞的瞬時轉染方法獲得的混合ExpiCHO細胞懸液然后通過促進ExpiCHO細胞的瞬時轉染后抗體表達的方法進行抗體表達。

2.如權利要去1所述增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法，其特征在于，ExpiCHO細胞的瞬時轉染方法包括下列步驟：

1)在瞬時轉染的前一天將ExpiCHO細胞傳代培養，調整細胞密度至2×10⁶cells/ml,將含有一定體積細胞的搖瓶放入搖床中進行培養；

2)瞬時轉染當天，所述ExpiCHO細胞計數，用新鮮培養基稀釋調整細胞密度為4×10⁶cells/ml，細胞活率在95％以上，得到ExpiCHO細胞懸液；

3)轉染前的準備，將配置好的A液與B液，混勻后靜置一段時間，得到混合滴液；

4)將所述混合滴液加入ExpiCHO細胞懸液中，按照細胞培養條件進行培養。

3.如權利要求2所述的所述增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法，其特征在于：所述A液包括含抗體輕重鏈的質粒與PBS緩沖液，所述含抗體輕重鏈的質粒中包括含抗體輕鏈質粒與含抗體重鏈質粒的比例為1:1，然后將所述含抗體輕重鏈的質粒與600μl的PBS緩沖液混合得到A液；所述B液包括PEI轉染試劑與PBS緩沖液；所述抗體輕重鏈的質粒的總質粒量與所述的ExpiCHO細胞懸液的細胞數量比為20μg:4×10⁷個細胞-12×10⁷個細胞；所述抗體輕重鏈的質粒的總質粒量與所述轉染試劑的添加量的質量比為1:2～1：6。

4.如權利要求2所述的所述增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法，其特征在于：所述的ExpiCHO細胞要在轉染的24小時內傳代一次；所述搖瓶為傳代時用250ml～1000ml規格的圓底搖瓶，轉染時使用125ml規格的圓底搖瓶；所述步驟1)中一定體積為10ml、20ml、30ml其中的一種；所述步驟3)中靜置的方法為室溫不低于29℃的條件，靜置時間為10～20分鐘或所述靜置為29℃靜置水浴其中的一種；所述細胞傳代培養與細胞培養的條件為37℃，8％CO²，搖床速度為110rpm。

5.如權利要求2所述的所述增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法，其特征在于：所述的抗體輕重鏈的總質粒量和所述的ExpiCHO細胞懸液的細胞數量比為20μg:8×10⁷個細胞；抗體輕重鏈的質粒的總質粒量與所述轉染試劑的添加量的質量比為1:4。

6.如權利要求2所述增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法，其特征在于：所述ExpiCHO細胞懸液還包括無血清培養基，所述無血清培養基為Transpro CD01，所述ExpiCHO細胞懸液包括轉染前加入4mmol/L～6mmol/L的谷氨酰胺。

7.如權利要求1所述增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法，其特征在于，促進ExpiCHO細胞的瞬時轉染后抗體表達的方法包括如下步驟：

瞬時轉染后得到重組ExpiCHO細胞，在轉染后4～10小時進行降溫培養，轉染后12～24小時加入水解物，加入的水解物的量為3g/L～8g/L，促進轉染細胞的蛋白表達。

8.如權利要求7所述增強ExpiCHO細胞瞬時轉染抗體表達的方法，其特征在于：所述水解物為植物蛋白水解物，所述植物蛋白水解物包括Bacto麥芽粉、BBL植物蛋白水解物、Difco精選大豆胨、Difco超濾酵母水解物、BBL酵母提取物、Bacto酵母提取物、Bacto酵母提取物、Oxoid一號植物蛋白胨、Oxoid非轉基因大豆蛋白胨、大豆SE50MK-NK、大豆SE50MK-NK、大豆WGE80M-UF超濾型、Kerry Hypep-1510、Kerry Hypep-4601N、Kerry Hypep-YE與Oxoid一號植物蛋白胨其中的一種或多種的混合物。