[發(fā)明專利]一種海洋貽貝消化腺組織病理損傷的定量方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210960592.6
• 申請日: 2022-08-11
• 公開（公告）號: CN115343285A
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邸雅楠;徐建洲;李太偉;張翼飛;李若凡;楊英麗;劉傲;曲夢杰
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: G01N21/84
• 分類號: G01N21/84;G01B11/06;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 杭州知見專利代理有限公司 33295
• 代理人: 趙越劍

本發(fā)明公開了一種海洋貽貝消化腺組織病理損傷的定量方法，首先將貽貝消化腺組織解剖，并制成HE染色組織切片，通過顯微觀察將其轉(zhuǎn)化為數(shù)字圖像，對貽貝消化腺消化管壁進(jìn)行測量并進(jìn)行定量指標(biāo)統(tǒng)計(jì)。本發(fā)明能夠定量描述貽貝消化腺組織所受病理損傷，得到具體的、可信度高的、受主觀經(jīng)驗(yàn)干擾少的量化數(shù)據(jù)。本發(fā)明為貽貝消化腺組織損傷研究提供有力工具，為污染物導(dǎo)致的生物組織水平響應(yīng)研究提供了檢測手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生態(tài)毒理學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種海洋貽貝消化腺組織病理損傷的定量方法。

背景技術(shù)

貽貝廣泛分布在從淡水到海洋，從淺海到深海的各種生境。貽貝進(jìn)行濾食活動，代謝率低，對污染物具有很強(qiáng)的富集能力，可以較好的反映水體的污染情況，因此被認(rèn)為是海洋中理想的環(huán)境檢測生物之一，其組織病理變化也可以指示生物損害與海洋環(huán)境健康狀況。

貽貝組織病理指標(biāo)是一類對外源脅迫敏感和可靠的生物標(biāo)志。目前，貽貝組織病理指標(biāo)應(yīng)用較多的為組織定性和半定量指標(biāo)，它們雖能顯示生物組織的結(jié)構(gòu)變化，但是由于是對病理圖像的主觀評價，容易產(chǎn)生誤差，可信度不高。組織病理的定量指標(biāo)能夠給出具體的量化數(shù)據(jù)，受主觀經(jīng)驗(yàn)干擾少，是對病理圖像的客觀評價。

但目前關(guān)于貽貝的定量指標(biāo)的研究少且不全面，其中已報道的相關(guān)研究中存在以下不足：利用消化腺管腔面積、周長等定量指標(biāo)對貽貝進(jìn)行健康評估，其在定量過程中需要臨摹消化管，而在實(shí)際工作中，每個生物樣本需要統(tǒng)計(jì)上百個消化管，工作量巨大、耗時長、不便于推廣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種海洋貽貝消化腺組織病理損傷的定量方法，避免人為操作造成的結(jié)構(gòu)損傷并且可以得出具體的、受主觀經(jīng)驗(yàn)干擾少得量化數(shù)據(jù)，對貽貝組織病理圖像客觀評價，可信度高，較好反映貽貝消化腺的損傷程度，進(jìn)而評估貽貝的健康狀態(tài)，暗示周圍環(huán)境對于貽貝帶來影響；此外該方法與貽貝組織健康狀態(tài)直接相關(guān)，并容易測量，便于推廣，客觀評價病理圖像，應(yīng)用價值高。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

一種海洋貽貝消化腺組織病理損傷的定量方法，包括以下步驟：

（1）組織切片：

按照標(biāo)準(zhǔn)貽貝組織生理切片操作進(jìn)行，包括：貽貝的培養(yǎng)，貽貝組織解剖與固定，組織脫水與透明化，組織包埋與透明化，切片、攤片與烤片，HE染色與封片，最終獲得切片；

（2）顯微觀察：

用光學(xué)顯微鏡使用100×和400×兩個不同倍數(shù)觀察每張切片，檢查合格后，對每張切片隨機(jī)拍照獲取至少100個消化腺細(xì)胞照片，獲得消化腺數(shù)字圖像，用于后續(xù)組織病理學(xué)分析；檢查合格即檢查在切片過程中沒有出現(xiàn)明顯氣泡、折疊及其他問題

（3）定量指標(biāo)：以海洋貽貝消化腺管腔壁厚度作為海洋貽貝消化腺組織病理損傷定量檢測指標(biāo)，以正常海洋貽貝消化腺數(shù)字圖像作為對照組進(jìn)行定量測定，定量測定的方法為：將消化腺數(shù)字圖像導(dǎo)入到圖像軟件處理，在圖像軟件中測量消化管壁厚，獲得每張切片的測量值，對測得的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析獲得的平均值作為定量指標(biāo)，將測試組與對照組的定量指標(biāo)進(jìn)行比對，即可對海洋貽貝消化腺組織病理損傷進(jìn)行定量分析。

作為優(yōu)選，步驟（1）中，HE染色與封片的具體步驟包括：脫蠟，至水，蘇木精染色，分化反藍(lán)，伊紅染色，脫水及透明化。

作為優(yōu)選，步驟（1）中，對于每個處理組設(shè)置3個生物重復(fù)，對于每一個生物重復(fù)獲得3張切片。

作為優(yōu)選，步驟（2）中，對每張切片隨機(jī)拍照獲取至少100個消化腺細(xì)胞照片是在400×放大倍數(shù)下進(jìn)行的。