[發明專利]一種基于表面展示羰基還原酶的全細胞催化合成2-甲基苯甲酮的方法在審
| 申請號： | 202210950271.8 | 申請日： | 2022-08-09 |
| 公開（公告）號： | CN115927138A | 公開（公告）日： | 2023-04-07 |
| 發明（設計）人： | 余世琴;周景文;楊文涵;吳美琪;陳堅;堵國成 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/62;C12P7/26;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇鈺瑩 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 表面 展示 羰基 還原酶 細胞 催化 合成 甲基 苯甲酮 方法 | ||
1.一種表面展示羰基還原酶的重組大腸桿菌，其特征在于，利用Lpp-OmpA或EhaA為錨定蛋白，在大腸桿菌表面展示羰基還原酶。
2.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，所述羰基還原酶為來源于Candida?parapsilosis的R型羰基還原酶。
3.根據權利要求1或2所述的重組大腸桿菌，其特征在于，以rha啟動子或T7啟動子啟動表達框表達。
4.根據權利要求3所述的重組大腸桿菌，其特征在于，按照啟動子、Lpp-ompA嵌合蛋白、連接肽、羰基還原酶基因、myc、終止子的順序順次連接至表達載體；
或者，按照啟動子、CtxB信號肽、羰基還原酶基因、myc、連接肽、EhaA、終止子的順序順次連接至表達載體。
5.一種表面展示羰基還原酶的方法，其特征在于，所述方法是利用權利要求1～4任一所述的重組大腸桿菌實現羰基還原酶的表面展示。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，將所述重組大腸桿菌在LB培養基中培養至OD6000.6-0.8，加入0.1～0.5mM的IPTG或10～20mM的鼠李糖。
7.一種全細胞轉化合成2-甲基苯甲酮的方法，其特征在于，利用權利要求1～4任一所的重組大腸桿菌在含有2-甲基苯甲醇的體系中轉化生成2-甲基苯甲酮。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，將所述重組大腸桿菌在LB培養基中培養至OD6000.6-0.8，加入0.1～0.5mM的IPTG或10～20mM的鼠李糖培養15～25h，收集菌體。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，將菌體細胞加入2-甲基苯甲醇和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸體系中，所述2-甲基苯甲醇和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的濃度比為1:2。
10.權利要求1～4任一所述重組大腸桿菌或權利要求5～9任一所述方法在全細胞催化生產2-甲基苯甲酮中的應用。
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