[發明專利]BIG-H3蛋白作為肝癌血清生物標志物的應用

在審

• 申請號: 202210947358.X
• 申請日: 2022-08-09
• 公開（公告）號: CN115308413A
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 孫維建;陳孝冬;陳琛斌;梁丹娜;周功挺;張宏博
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學附屬第二醫院（溫州醫科大學附屬育英兒童醫院）
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 李品

1.一種BIG-H3蛋白，其特征在于：作為肝癌血清生物標志物用于非診斷目的的肝癌判斷。

2.一種肝癌血清生物標志物，其特征在于：包括BIG-H3蛋白。

3.根據權利要求2所述的肝癌血清生物標志物，其特征在于：所述BIG-H3蛋白為人的BIG-H3蛋白。

4.一種肝癌血清生物標志物試劑盒，用于檢測如權利要求1至3任意一項所述的肝癌血清生物標志物，其特征在于：包括BIG-H3蛋白的免疫球蛋白G抗體。

5.根據權利要求4所述肝癌血清生物標志物試劑盒，其特征在于：包括定量芯片、樣品稀釋液、20×洗液I、20×洗液II、標準品混合物、BIG-H3蛋白的免疫球蛋白G抗體、Cy3-鏈霉親和素、玻片清洗和干燥器、密封條。

6.一種如權利要求1至3任意一項所述的肝癌血清生物標志物的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)獲取血清樣本；

b)檢測血清樣本

b1)定量芯片干燥

b2)標準品的配置

b3)定量芯片的操作流程

b31)在定量芯片的每個孔中加入100μL的樣品稀釋液，室溫搖床上孵育1h，封閉定量芯片；

b32)、抽去每個孔中的樣品稀釋液，從步驟2配置的標準品中取80μL的標準液與血清樣本一起添加到孔中，4℃過夜孵育；

b33)清洗定量芯片，首先用1×洗液I進行清洗，每孔250μL的1×洗液I，清洗10次，每次震蕩10s，震蕩強度選擇高，用去離子水稀釋20×洗液I,然后換用1×洗液II對通道進行清洗，每孔250μL的1×洗液II，清洗6次，每次震蕩10s，震蕩強度選擇高，用去離子水稀釋20×洗液II；

b34)BIG-H3蛋白的免疫球蛋白G抗體的孵育,離心裝有BIG-H3蛋白的免疫球蛋白G抗體的小管，然后加入1.4ml的樣品稀釋液，混合均勻后再次快速離心，然后添加80μL的BIG-H3蛋白的免疫球蛋白G抗體到每個孔中，RT搖床上孵育2小時；

b35)清洗，同步驟b33)；

b36)Cy3-鏈霉親和素的孵育,離心裝有Cy3-鏈霉親和素的小管，然后加入1.4ml的樣品稀釋液，混合均勻后再次快速離心，添加80μL的Cy3-鏈霉親和素到每個孔中，用鋁箔紙包住定量芯片避光孵育，RT搖床上孵育1個小時；

b37)清洗，同步驟b33)；

b38)熒光檢測,采用激光掃描儀掃描信號，采用Cy3或者綠色通道；

b39)采用QAH-CUST的數據分析軟件來進行數據分析，獲得每例血清樣本中BIG-H3蛋白的含量。

7.根據權利要求6所述肝癌血清生物標志物的檢測方法，其特征在于：所述步驟

b1)定量芯片干燥具體為：

將定量芯片從盒子中取出來，在室溫放置20-30min后，將包裝袋打開，揭開密封條，然后將定量芯片放在干燥器或者室溫干燥1-2小時。

8.根據權利要求6所述肝癌血清生物標志物的檢測方法，其特征在于：所述步驟b2)標準品的配置具體為：

b21)添加500μL的樣品稀釋液到標準品混合物的小管中，重新溶解標準品混合物。打開小管前，先快速的離心，輕輕的上下吹打溶解粉末，標記這個小管為Std 1；

b22)分別標記6個干凈的離心管為Std2、Std3、Std4、Std5、Std6、Std7，添加200μL的樣品稀釋液到每個離心管中；

b23)從標記為Std 1的離心管中抽取100μL樣品稀釋液加入到標記為Std2的離心管中輕輕混合，然后從標記為Std 2的離心管中抽取100μL樣品稀釋液加入到標記為Std 3的離心管中，依次類推，如此梯度稀釋至標記為Std7的離心管中，得到標準液；

b24)從標記為Std7的離心管中抽取100μL的標準液到另一個新的離心管中，作為標準品。