[發明專利]一種豬δ冠狀病毒基因工程亞單位疫苗及其應用在審

申請號：	202210947100.X	申請日：	2022-08-09
公開（公告）號：	CN115887633A	公開（公告）日：	2023-04-04
發明（設計）人：	李彬;李基棕;任麗莉;趙淑慶;張寶太;范寶超;汪偉;郭容利;周金柱;陳國廣	申請（專利權）人：	江蘇省農業科學院
主分類號：	A61K39/215	分類號：	A61K39/215;A61P31/14;C07K14/165;C12N15/50;C12N15/866;C12N5/10
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摘要：
搜索關鍵詞：	種豬冠狀病毒基因工程單位疫苗及其應用
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【說明書】：

本發明提供一種豬δ冠狀病毒基因工程亞單位疫苗及其應用，涉及獸用生物制品領域。所述豬δ冠狀病毒基因工程亞單位疫苗包含重組PDCoV?S蛋白或重組PDCoV?RBD蛋白；所述重組PDCoV?S蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示；所述重組PDCoV?RBD蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示。本發明利用桿狀病毒表達系統表達的重組蛋白純化工藝簡便，便于大規模生產。本發明所述方法制備的豬δ冠狀病毒基因工程亞單位疫苗填補了國內外尚無豬δ冠狀病毒亞單位疫苗的空白，可用于預防豬δ冠狀病毒的感染。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品領域，具體涉及一種豬δ冠狀病毒基因工程亞單位疫苗及其應用。

背景技術

豬δ冠狀病毒(PDCoV)是一種新發的豬腸道致病性冠狀病毒，可引起新生仔豬水樣腹瀉、嘔吐和脫水，給養豬業造成巨大經濟損失。疫苗接種是控制PDCoV疾病和保護仔豬免受PDCoV感染的有效措施。然而，目前尚無針對PDCoV的商品化疫苗。PDCoVS蛋白在病毒進入和感染中起重要作用，是疫苗研發的候選抗原。RBD中含有S蛋白的B細胞表位，是亞單位疫苗研發關注的焦點。因此，本發明制備的亞單位疫苗以S蛋白的全長、RBD區域作為抗原。

Bac-to-桿狀病毒表達系統(Baculovirus?expression?vector?system,BEVs)是近年來發展十分迅速的一種真核表達系統。該表達系統具有外源基因容量大，重組蛋白表達量高，可對目的蛋白進行表達后修飾，易于大規模生產和生物安全性高等優點。因此，BEVs已被認作一種在昆蟲細胞中大量表達重組蛋白的強大表達載體，可以為亞單位疫苗的研發提供技術支持。

本發明利用桿狀病毒表達系統在昆蟲細胞中大量表達重組PDCoV-S和PDCoV-RBD蛋白，研制出具有良好免疫效果的亞單位疫苗，對PDCoV的防控具有重要意義。

發明內容

為解決上述問題，本發明目的在于提供一種豬δ冠狀病毒基因工程亞單位疫苗及其應用。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：一種豬δ冠狀病毒亞單位疫苗，包含重組PDCoV-S蛋白或重組PDCoV-RBD蛋白；所述重組PDCoV-S蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示；所述重組PDCoV-RBD蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

進一步的，所述重組PDCoV-S蛋白的編碼基因如SEQ?ID?No.3所示。

進一步的，所述重組PDCoV-RBD蛋白的編碼基因如SEQ?ID?No.4所示。

進一步的，所述重組PDCoV-S蛋白的制備方法包括以下步驟：

1)將如SEQ?ID?No.3所示的基因克隆到表達載體上，構建得到重組質粒；

2)將所述重組質粒轉染至真核細胞表達，再經蛋白純化，得到所述豬δ冠狀病毒重組蛋白。

進一步的，所述重組PDCoV-RBD蛋白的制備方法包括以下步驟：

1)將如SEQ?ID?No.4所示的基因克隆到表達載體上，構建得到重組質粒；

2)將所述重組質粒轉染至真核細胞表達，再經蛋白純化，得到所述豬δ冠狀病毒重組蛋白。