[發明專利]靶向膜聯蛋白A1的納米抗體及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202210946415.2
• 申請日: 2022-08-08
• 公開（公告）號: CN116217719A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 李金聲;丁有斌;徐小龍;龍穎;賈琳;李茁;李志杰;王繼剛
• 申請（專利權）人: 深圳市人民醫院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/00;C12N15/70;C12N15/13;G01N33/574;A61K47/68
• 代理公司: 深圳壹舟知識產權代理事務所(普通合伙) 44331
• 代理人: 孔祥丹

1.一種靶向膜聯蛋白A1的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體包括納米抗體Nb4，其中，所述納米抗體Nb4的氨基酸序列如Seq.ID?NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體包括4個框架區FR1、FR2、FR3、FR4和3個互補決定區CDR1、CDR2、CDR3；

所述納米抗體Nb4中，FR1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，FR2的氨基酸序列如SEQID?NO.3所示，FR3的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示，FR4的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.7所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.8所示。

3.根據權利要求1所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體Nb4的堿基序列如Seq.ID?NO.9所示。

4.一種權利要求1～3任一所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

將膜聯蛋白A1進行表達純化，得到膜聯蛋白A1目的蛋白；

將所述膜聯蛋白A1目的蛋白包被在免疫管上進行富集篩選，得到噬菌體文庫；

將所述噬菌體文庫的洗脫液進行PCR擴增并進行ELISA驗證，再進行二代測序，并根據測序結果合成納米抗體的基因序列；

將所述納米抗體的基因序列克隆至表達載體中得到重組質粒，將所述重組質粒轉入宿主細胞中誘導表達并進行純化，得到靶向膜聯蛋白A1的納米抗體。

5.根據權利要求4所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體的制備方法，其特征在于，所述目的蛋白的濃度為25～27μg/mL。

6.根據權利要求4所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體的制備方法，其特征在于，所述富集篩選的步驟中，進行2～3輪富集篩選。

7.根據權利要求4所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體的制備方法，其特征在于，所述表達載體選自PET-14B載體。

8.權利要求1～3任一所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體在制備靶向膜聯蛋白A1的分子探針中的應用。

9.權利要求1～3任一所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體在制備用于腫瘤靶向治療的藥物中的應用。

10.權利要求1～3任一所述的靶向膜聯蛋白A1的納米抗體在免疫治療以及納米材料修飾的藥物遞送中的應用。