[發(fā)明專利]一種維血寧合劑的HPLC檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210945034.2
• 申請日: 2022-08-08
• 公開（公告）號: CN115326955A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董泰瑋;鄒俊波;秦媛;張小飛;史亞軍;孫靜;問思華;楊煥
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 全學(xué)榮;張娟

1.一種維血寧合劑及其中間品的HPLC檢測方法，其特征在于：它包括如下步驟：

1)對照品溶液制備：取兒茶素、表兒茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜蘆醇和/或木犀草素對照品，加甲醇溶解稀釋成溶液，即得對照品溶液；

2)供試品溶液制備：取待檢樣品，加甲醇溶液溶解，過濾，取濾液作為供試品溶液；

3)分別吸取對照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀；色譜條件如下：

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：以甲醇為流動相A，以0.2％磷酸水為流動相B；梯度洗脫程序0～5min，75％B；5～15min，75％B→65％B；15～25min，65％B→55％B；25～35min，55％B→40％B；35～45min，40％B→30％B；45～55min，30％B→20％B；55～60min，20％B→65％B；60～62min，65％B→75％B。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的HPLC檢測方法，其特征在于：步驟1)所述對照品與甲醇的質(zhì)量體積比為0.5～250μg：1ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的HPLC檢測方法，其特征在于：步驟2)所述待檢樣品和甲醇的體積比為1～5ml：1～50ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的HPLC檢測方法，其特征在于：所述待檢樣品為維血寧合劑或其中間品。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的HPLC檢測方法，其特征在于：所述中間品為維血寧合劑的原料藥提取液或原料藥提取液濃縮的清膏。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的HPLC檢測方法，其特征在于：步驟3)所述色譜條件中色譜柱：Acclaim120 C18，250mm×4.6mm,5μm，柱溫30℃，進(jìn)樣量10～50μL，流速為1ml/min，檢測波長：210nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任意一項所述的HPLC檢測方法，其特征在于：所述維血寧合劑及其中間品的指紋圖譜中有應(yīng)有27個共有特征峰，所述共有特征峰包含與兒茶素、表兒茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜蘆醇和木犀草素相應(yīng)的色譜峰。

8.一種維血寧合劑及其中間品指標(biāo)成分的含量測定方法，其特征在于：它包括如下步驟：

1)取維血寧合劑或其中間品，以及兒茶素、表兒茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜蘆醇和/或木犀草素對照品，按權(quán)利要求1～6任一項所述方法檢測；

2)按外標(biāo)法以峰面積計算維血寧合劑或其中間品中兒茶素、表兒茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜蘆醇和/或木犀草素的含量。

或：

1)取維血寧合劑或其中間品，以及兒茶素、表兒茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜蘆醇、木犀草素對照品中的任意一種，按權(quán)利要求1～6任一項所述方法檢測；

2)先按外標(biāo)法以峰面積計算維血寧合劑或其中間品中對照品對應(yīng)成分含量，再使用相對校正因子計算維血寧合劑或其中間品中其余成分的含量。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述含量測定方法，其特征在于：所述相對校正因子按照下述方法得到：

取兒茶素、表兒茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜蘆醇和木犀草素對照品，根據(jù)權(quán)利要求1～3、6任意一項所述方法檢測，擇一對照品為內(nèi)參物，根據(jù)如下公式計算：

f_s/i＝f_s/f_i＝A_s×C_i/(A_i×C_s)；式中A_s為內(nèi)參物s峰面積，C_s為內(nèi)參物s濃度，A_i為組分i峰面積，C_i為組分i濃度。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的含量測定方法，其特征在于：所述內(nèi)參物為虎杖苷時，虎杖苷與兒茶素的相對矯正因子為0.3754，虎杖苷與表兒茶素的相對矯正因子為0.3486，虎杖苷與染料木素的相對矯正因子為0.5887，虎杖苷與芒柄花素的相對矯正因子為0.6599，虎杖苷與槲皮素的相對矯正因子為0.5972，虎杖苷與白藜蘆醇的相對矯正因子為0.5853，虎杖苷與木犀草素的相對矯正因子為0.5176。