[發(fā)明專(zhuān)利]構(gòu)建BRCA1基因突變的乳腺癌模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210943094.0
• 申請(qǐng)日: 2022-08-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115927314A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 牛冬;汪滔;馬翔;王磊;程銳;趙澤英;方園;胡世芳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京啟真基因工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/113
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/113;C12N9/22;C12N5/10;C12N15/85;C12N15/70;C07K1/22;C12N15/62;A01K67/027;C12Q1/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種試劑盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白；

所述BRCA1-gRNA3為sgRNA，其靶序列結(jié)合區(qū)如SEQ?ID?NO：16中第3-22位核苷酸所示；所述BRCA1-gRNA4為sgRNA，其靶序列結(jié)合區(qū)如SEQ?ID?NO：17中第3-22位核苷酸所示；所述NCN蛋白為Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白；

所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)或(c)：(a)制備重組細(xì)胞；(b)制備乳腺癌模型豬；(c)制備乳腺癌細(xì)胞模型或乳腺癌組織模型或乳腺癌器官模型。

2.一種試劑盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和PRONCN蛋白；

BRCA1-gRNA3為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；

BRCA1-gRNA4為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；

所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信號(hào)肽、分子伴侶蛋白、蛋白標(biāo)簽、蛋白酶酶切位點(diǎn)、核定位信號(hào)、Cas9蛋白、核定位信號(hào)；

所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)或(c)：(a)制備重組細(xì)胞；(b)制備乳腺癌模型豬；(c)制備乳腺癌細(xì)胞模型或乳腺癌組織模型或乳腺癌器官模型。

3.一種試劑盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和特異質(zhì)粒；

BRCA1-gRNA3為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；

BRCA1-gRNA4為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；

所述特異質(zhì)粒自上游至下游依次包括如下元件：?jiǎn)?dòng)子、操縱子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、PRONCN蛋白的編碼基因、終止子；所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信號(hào)肽、分子伴侶蛋白、蛋白標(biāo)簽、蛋白酶酶切位點(diǎn)、核定位信號(hào)、Cas9蛋白、核定位信號(hào)；

所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)或(c)：(a)制備重組細(xì)胞；(b)制備乳腺癌模型豬；(c)制備乳腺癌細(xì)胞模型或乳腺癌組織模型或乳腺癌器官模型。

4.BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白在制備試劑盒中的應(yīng)用；

BRCA1-gRNA3為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；BRCA1-gRNA4為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；NCN蛋白為權(quán)利要求1中所述的NCN蛋白；

所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)或(c)：(a)制備重組細(xì)胞；(b)制備乳腺癌模型豬；(c)制備乳腺癌細(xì)胞模型或乳腺癌組織模型或乳腺癌器官模型。

5.BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和PRONCN蛋白在制備試劑盒中的應(yīng)用；

BRCA1-gRNA3為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；BRCA1-gRNA4為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；PRONCN蛋白為權(quán)利要求2中所述的PRONCN蛋白；

所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)或(c)：(a)制備重組細(xì)胞；(b)制備乳腺癌模型豬；(c)制備乳腺癌細(xì)胞模型或乳腺癌組織模型或乳腺癌器官模型。

6.BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和特異質(zhì)粒在制備試劑盒中的應(yīng)用；

BRCA1-gRNA3為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；BRCA1-gRNA4為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；特異質(zhì)粒為權(quán)利要求3中所述的特異質(zhì)粒；

所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)或(c)：(a)制備重組細(xì)胞；(b)制備乳腺癌模型豬；(c)制備乳腺癌細(xì)胞模型或乳腺癌組織模型或乳腺癌器官模型。

7.一種制備重組細(xì)胞的方法，包括如下步驟：將BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白共轉(zhuǎn)染豬細(xì)胞，得到重組細(xì)胞；BRCA1-gRNA3為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；BRCA1-gRNA4為權(quán)利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；NCN蛋白為權(quán)利要求1中所述的NCN蛋白。