[發(fā)明專利]一種用于SFTS病毒核酸檢測(cè)的探針和試紙條及使用方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210936028.0
• 申請(qǐng)日: 2022-08-05
• 公開（公告）號(hào): CN115932238A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳雨欣;陳琳;鄒明園;吳超;沈瀚;黃睿;楊玥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京鼓樓醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N33/543;G01N33/569;G01N21/64
• 代理公司: 南京禾祁專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32462
• 代理人: 孫建朋

本發(fā)明公開了一種用于SFTS病毒核酸檢測(cè)的探針和試紙條及使用方法，包括探針H1和探針H2，用于特異性檢測(cè)SFTS病毒；本發(fā)明還公開了一種用于SFTS病毒核酸檢測(cè)的試紙條及使用方法，配合上述探針，通過層析法高效檢測(cè)SFTS病毒。本發(fā)明通過特異性探針配合側(cè)向免疫層析試紙條，對(duì)SFTS病毒進(jìn)行檢測(cè)，能夠在15分鐘內(nèi)獲得檢測(cè)結(jié)果，無需RNA提取等繁瑣步驟，操作方便高效，且特異性強(qiáng)，靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于SFTS病毒核酸檢測(cè)的探針和試紙條及使用方法。

背景技術(shù)

嚴(yán)重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒(SFTSV)是一種新型布尼亞病毒。近年來，SFTSV感染病例數(shù)穩(wěn)步增長。由于SFTSV可以在人與人之間傳播，它將使公眾面臨感染風(fēng)險(xiǎn)。在2018年重點(diǎn)疾病藍(lán)圖清單年度審查中，世界衛(wèi)生組織將SFTSV感染列為緊急情況下研發(fā)的重點(diǎn)疾病。然而，SFTSV的發(fā)病機(jī)制仍不清楚，還沒有特定的治療方法或疫苗來對(duì)抗SFTSV的感染。因此嚴(yán)重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒的檢測(cè)對(duì)SFTS感染防治具有重要意義，預(yù)防病癥，控制病毒傳播，有效管理患者。

目前，臨床實(shí)驗(yàn)室檢查主要以核酸檢測(cè)和血清抗體檢測(cè)為主。血清抗體檢測(cè)主要用于嚴(yán)重發(fā)熱伴血小板減少綜合征的篩查，但是易出現(xiàn)假陰性結(jié)果。對(duì)于新型布尼亞病毒IgG抗體陽性者應(yīng)進(jìn)一步檢SFTSV-RNA，以確定是否為現(xiàn)癥感染，然而核酸PCR方法復(fù)雜，對(duì)于環(huán)境和技術(shù)人員要求嚴(yán)格。發(fā)熱伴血小板減少綜合征防治指南(2010版)指出，SFTSV的實(shí)驗(yàn)室檢查仍然以SFTSV-RNA檢測(cè)作為金標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用最為廣泛的q-PCR方法雖然技術(shù)成熟，特異性高。但是，q-PCR需要在精密的大型熒光定量PCR儀上進(jìn)行長時(shí)操作，對(duì)于操作人員有一定的技術(shù)要求，其儀器昂貴，耗時(shí)較長很難在小型醫(yī)院及偏遠(yuǎn)地區(qū)開展檢測(cè)，因此PCR很難實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)(P?OCT)。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明期望提供一種用于SFTS病毒核酸檢測(cè)的探針和試紙條及使用方法，通過側(cè)向免疫層析試紙條，無需RNA提取，在等溫?zé)o酶環(huán)境下快速、高特異性、高靈敏度地檢測(cè)SFTS核酸，實(shí)現(xiàn)SFTS現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種用于SFTS病毒核酸檢測(cè)的探針H1和探針H2序列分別如下：

H1:CTGTTGACTCCTCTTTGTTCTTCAACAGTCACCCCAGAACAAAGA?GGAG

H2:TTGTTCTGGGGTGACTGTTGAAGAACAAAGAGGAGTCAACAGTC?ACCCC

進(jìn)一步地，所述探針H1和探針H2均為發(fā)夾結(jié)構(gòu)，探針H1的5’端由地高辛修飾，探針H2的5’端由生物素修飾。

進(jìn)一步地，所述探針與目的檢測(cè)序列混合，形成H1+H2雜交雙鏈。

本發(fā)明還另外提供一種用于SFTS病毒核酸檢測(cè)的試紙條，所述試紙條為側(cè)向免疫層析試紙條，檢測(cè)上述H1+H2雜交雙鏈。

進(jìn)一步地，所述試紙條依次設(shè)置樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。

進(jìn)一步地，所述結(jié)合墊上包被AlexaFluor647熒光素和親和素雙標(biāo)記的納米微球；所述硝酸纖維素膜標(biāo)有檢測(cè)線和質(zhì)控線。

這里，檢測(cè)線(test?line)標(biāo)記為“T”，質(zhì)控線(control?line)標(biāo)記為“C”。

進(jìn)一步地，所述樣品墊、結(jié)合墊為玻璃纖維材質(zhì)；所述吸收墊為纖維素材質(zhì)。

進(jìn)一步地，所述檢測(cè)線上噴灑抗地高辛，所述質(zhì)控線上涂抹生物素。

本發(fā)明還另外提供一種用于SFTS病毒核酸檢測(cè)的試紙條的使用方法，使用上述試紙條，包括以下步驟：