[發(fā)明專利]檢測新疆楊基因組的PCR引物、檢測方法及PCR檢測試劑盒

在審

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• 申請日: 2022-08-04
• 公開（公告）號: CN115198031A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 安新民;薛胤軒;李影;吳茹茜;陳婷婷;齊婉芯;魯海琳;郭斌
• 申請（專利權(quán)）人: 北京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京思元知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍

1.用于將新疆楊(Populus alba var.pyramidalis Bge.)與其它楊屬樹種基因組相區(qū)分的特異性PCR引物對，其特征在于，選自引物對1或引物2中的任何一對；所述引物對1的上游引物的核苷酸序列為：TTATGAACCTGCTGTTTGTGAAG，所述引物對1的下游引物的核苷酸序列為：GGATGAGAATAAAGCCAGAAGAA；

所述引物對2的上游引物的核苷酸序列為：ACCGTCGGTATAAAATACTCGGG，所述引物對2的下游引物的核苷酸序列為：TCGTCCACCCTCAAGGAAAA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性PCR引物對，其特征在于，所述的其它楊屬樹種包括銀白楊(Populus alba L.)、響葉楊(Populus adenopoda Maxim.)和山楊(Populusdavidiana Dode)。

3.權(quán)利要求1所述的特異性PCR引物對在檢測新疆楊基因組中的應(yīng)用。

4.一種將新疆楊(Populus alba var.pyramidalis Bge.)與其他楊屬樹種相區(qū)分的PCR檢測方法，其特征在于，包括：

(1)提取待檢測的楊樹樣品DNA；

(2)以提取的楊樹樣品DNA為模板，以權(quán)利要求1的引物對1或引物對2的上游引物和下游引物為PCR擴(kuò)增引物對的上游引物和下游引物為PCR擴(kuò)增引物建立PCR反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(3)如果出現(xiàn)了特異性的擴(kuò)增條帶，則表明待檢測的楊樹樣品中含有新疆楊基因組成分。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR檢測方法，其特征在于，以權(quán)利要求1的引物對1的上游引物和下游引物為PCR擴(kuò)增引物建立PCR反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，如果出現(xiàn)了856bp的特異性擴(kuò)增條帶，則表明待檢測的楊樹樣品中含有新疆楊基因組成分；以權(quán)利要求1的引物對2的上游引物和下游引物為PCR擴(kuò)增引物對建立PCR反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，如果出現(xiàn)了648bp的特異性擴(kuò)增條帶，則表明待檢測的楊樹樣品中含有新疆楊基因組成分。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR檢測方法，其特征在于，步驟(2)中所建立的PCR反應(yīng)體系包括：待檢測的樣品DNA 2μL，PCR Mix 10μL，上游引物0.5μL，下游引物0.5μL，雙蒸水7μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR檢測方法，其特征在于，步驟(2)中所述的PCR擴(kuò)增的程序包括：95℃5min，95℃30s，退火30s，72℃30s，35個循環(huán)，72℃5min，12℃,∞。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR檢測方法，其特征在于，所述的其它楊屬樹種包括銀白楊(Populus alba L.)、響葉楊(Populus adenopoda Maxim.)、山楊(Populus davidianaDode)。

9.一種檢測新疆楊基因組的PCR檢測試劑盒，包括：Taq酶，dNTP，Mg²⁺，ddH₂O和PCR擴(kuò)增引物；其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增引物選自引物對1或引物2中的任何一對；所述引物對1的上游引物的核苷酸序列為：TTATGAACCTGCTGTTTGTGAAG，所述引物對1的下游引物的核苷酸序列為：GGATGAGAATAAAGCCAGAAGAA；

所述引物對2的上游引物的核苷酸序列為：ACCGTCGGTATAAAATACTCGGG，所述引物對2的下游引物的核苷酸序列為：TCGTCCACCCTCAAGGAAAA。

10.權(quán)利要求9所述的PCR檢測試劑盒在檢測新疆楊基因組中的應(yīng)用。