[發(fā)明專利]一種基因增強型免疫細胞治療肝硬化的方法

有效

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• 申請日: 2022-08-04
• 公開（公告）號: CN115925920B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設計）人: 王正好;趙理
• 申請（專利權）人: 瑞因細胞工程科技（廣州）有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/10;C12N15/21;A61K39/395;A61K35/17;A61K48/00;A61K38/21;A61P1/16;A61P11/00
• 代理公司: 北京云嘉湃富知識產權代理有限公司 11678
• 代理人: 陳順華

本發(fā)明涉及一種基因增強型免疫細胞治療肝硬化的方法。本發(fā)明將IFN?α導入到NK細胞中，能夠增強NK細胞的活性，繼而可通過殺傷活化HSC從而達到抗纖維化目的，能夠抑制肝纖維化是防止肝硬化重要的治療手段。進一步的所述轉基因的NK細胞與特異性針對IGFBP7的單克隆抗體聯(lián)用后能夠抑制肝星狀細胞纖維連接蛋白的表達增強肝星狀細胞的凋亡進而較好的實現(xiàn)抗肝纖維化，進而實現(xiàn)抗肝硬化的效果。

技術領域

本申請涉及生物領域，更具體的涉及一種基因增強型免疫細胞治療肝硬化的方法。

背景技術

肝硬化是臨床常見的慢性進行性肝病，由一種或多種病因長期或反復作用形成的彌漫性肝損害。在我國大多數為肝炎后肝硬化，少部分為酒精性肝硬化和血吸蟲性肝硬化。病理組織學上有廣泛的肝細胞壞死、殘存肝細胞結節(jié)性再生、結締組織增生與纖維隔形成，導致肝小葉結構破壞和假小葉形成，肝臟逐漸變形、變硬而發(fā)展為肝硬化。早期由于肝臟代償功能較強可無明顯癥狀，后期則以肝功能損害和門脈高壓為主要表現(xiàn)，并有多系統(tǒng)受累，晚期常出現(xiàn)上消化道出血、肝性腦病、繼發(fā)感染、脾功能亢進、腹水、癌變等并發(fā)癥。

肝纖維化與肝硬化是慢性肝病發(fā)展過程中的不同的病理階段。肝纖維化是肝臟膠原纖維組織過度的沉積的結果；肝硬化是嚴重肝纖維化的結果。肝硬化肝細胞、血管、膽管等正常組織結構發(fā)生紊亂，病理表現(xiàn)為假小葉結構。慢性肝炎反復活動就容易形成肝纖維化，肝纖維化是肝硬化的必經之路。肝纖維化時，纖維組織過度沉積，但肝臟的基本結構沒有發(fā)生質的改變；而肝硬化表現(xiàn)纖維組織過度沉積，而且肝臟的基本結構已被破壞。因此，肝纖維化及早期的肝硬化可以逆轉，但中晚期肝硬化則難以逆轉。

肝纖維化是機體對慢性肝損傷的一種修復反應，是慢性肝病的共有病理變化。肝纖維化的特征改變是肝臟內細胞外基質的過度沉積。目前的研究證實肝星狀細胞的激活是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。各種因素通過不同方式和途徑作用于肝臟中的HSCs以及纖維形成細胞導致其生物學及功能變化，引起肝纖維化。各種細胞因子、過氧化產物和ECM成分等與HSCs受體結合后，激活一系列細胞內分子，最終通過調控HSCs基因表達調節(jié)肝纖維化過程。TGF-β是以無活性形式合成和分泌的。活化的TGF-β結合I型和II型受體形成異二聚體。TGF-β的活化引起TGF-βRII的去磷酸化，進而引起細胞質Smad轉導子磷酸化，導致靶標基因的轉錄，Smad7能拮抗細胞質中Smad級聯(lián)反應，限制TGF-β效應。Smad7的過度表達可抑制HSCs轉分化并將其阻止在靜止階段。通過分析HSCs中Smad7依賴的mRNA的表達譜，鑒定出分化抑制子1基因。Smad7異常表達可明顯減少Id1的表達，相反地，Id1在HSCs中的高表達將促進細胞活化并且繞過Smad7依賴的轉分化抑制。Id1作為HSCs中TGF-β/激活素受體樣激酶1/Smad7的目標基因，有可能是一個調控轉分化的關鍵因子。

此外，近來NK細胞與肝纖維化的關系日益受到重視，部分研究表明激活NK細胞可起到抗肝纖維化作用。首先，NK細胞的消耗可加速CC14或1，4-二氫-3，5-吡啶二甲酸二乙酯(DDC)誘導的肝纖維化進程。其次，缺乏B/T/NK細胞的SCID小鼠比僅缺乏B/T細胞的SCID小鼠肝纖維化程度更嚴重。第三，polyI：C的治療可活化NK細胞并抑制肝纖維化，而NK細胞數量的減少可拮抗polyI：C的抗纖維化效應，提示NK細胞有助于polyI：C抗纖維化作用。在慢性肝損傷時，NK細胞可能較先殺傷肝內活化的HSCs，從而起到抗肝纖維化作用。總之，在NK細胞與HSC的交互作用過程中，活化的HSC激活NK細胞，NK細胞又通過多種途徑抑制HSC的活性并產生IFN，進一步激活同種細胞，發(fā)揮改善肝纖維化的作用。

但是目前，采用特異性的抑制藥物與NK細胞來共同抑制干纖維化仍有待進一步的研究。

發(fā)明內容

發(fā)明人通過研究發(fā)現(xiàn)，IFN-α能夠增強NK細胞的活性，繼而可通過殺傷活化HSC從而達到抗纖維化目的。而抑制肝纖維化是防止肝硬化重要的治療手段。

一方面，本發(fā)明提供了一種轉IFN-α基因的NK細胞。