[發明專利]一種幾丁質酶N端截短突變體及其應用

在審

• 申請號: 202210930961.7
• 申請日: 2022-08-04
• 公開（公告）號: CN115851675A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 潘麗霞;季風;何斌;楊登峰;陽麗艷;吳軍華
• 申請（專利權）人: 廣西科學院;廣西華仁醫學科技集團有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/26;C12P19/14;C12R1/19
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 陳偉

1.一種N端截短的幾丁質酶突變體，其特征在于：所述的幾丁質酶突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。

2.一種編碼權利要求1所述的幾丁質酶突變體的核酸分子，其特征在于：所述的核酸分子的序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示。

3.一種載體，其特征在于：所述的載體包含權利要求2所述的核酸分子；所述的載體包括質粒、病毒或噬菌體，優選為pET22b。

4.一種宿主細胞，其特征在于：所述的宿主細胞包含權利要求2所述的核酸分子或權利要求3所述的載體；所述的宿主細胞包括微生物、植物或動物細胞，優選為大腸桿菌。

5.權利要求2所述的核酸分子、權利要求3所述的載體或權利要求4所述的宿主細胞在制備幾丁質酶突變體中的應用。

6.一種權利要求1所述的幾丁質酶突變體的制備方法，其特征在于：所述的方法包括以下步驟：

(1)將權利要求2所述的核酸分子與質粒載體連接，得到重組質粒；

(2)將所述重組質粒轉化至克隆菌株，得到重組克隆菌株；

(3)提取所述重組克隆菌株中的質粒，轉化至表達菌株，得到重組表達菌株；

(4)將重組表達菌株進行誘導培養，收集菌體并破碎，得到幾丁質酶。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述的載體為pET22b；所述的重組克隆菌株為E.coli DH5α；所述的重組表達菌株為E.coli BL21。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：步驟(4)中所述的誘導培養為：將重組表達菌株接入含有氨芐青霉素的第一LB培養基中在36-38℃下培養12-18h，再按照1％v/v的接種量接種至含氨芐青霉素的第二LB培養基中，在36-38℃下培養至OD600＝0.6-0.8，然后加入異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，于25-30℃，180-200rpm下誘導8-10h。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述的第一LB培養基或第二LB培養基中氨芐青霉素的濃度獨立地為98-102mg/mL；所述的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷在第二LB培養基中的終濃度為0.00008-0.00012M。

10.權利要求1所述的幾丁質酶突變體在幾丁質降解中的應用。