[發明專利]一種基于生物礦化DNA框架納米機器人、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202210925865.3
• 申請日: 2022-08-03
• 公開（公告）號: CN115844853A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 那娜;王小妮;歐陽津
• 申請（專利權）人: 北京師范大學
• 主分類號: A61K9/52
• 分類號: A61K9/52;A61K47/26;A61K47/04;A61K31/704;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 陳娟

1.一種DNA框架納米機器人，其特征在于，通過由4條ssDNA鏈形成的四維納米結構、單個粘性末端的 siPLK1 接頭組成；

所述ssDNA的基因序列為：

H1:

ACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTATTTTTTTTTTTTTTTTCAACATCAGTCTGATAAGCTACATTGGATGCTCTAGCTTATCAGACTG

H1-FAM:

ACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTATTTTTTTTTTTTTTTTCAACATCAGTCTGA/iBHQ2dT/AAGCTACATTGGATGCTCTAGCTTA/iFAMdT/CAGACTG

H2:

TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGATGCGAGGGTCCAATACTTTTTTTTTTTTTTTTCAACATCAGTCTGATAAGCTACATTGGATGCTCTAGCTTATCAGACTG

H2-FAM:

TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGATGCGAGGGTCCAATACTTTTTTTTTTTTTTTTCAACATCAGTCTGA/iBHQ2dT/AAGCTACATTGGATGCTCTAGCTTA/iFAMdT/CAGACTG

H3:

TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTCTTTTTTTTTTTTTTTTCAACATCAGTCTGATAAGCTACATTGGATGCTCTAGCTTATCAGACTG

H3-FAM: TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTCTTTTTTTTTTTTTTTTCAACATCAGTCTGA/iBHQ2dT/TAAGCTACATTGGATGCTCTAGCTTA/iFAMdT/TCAGACTG

H4:

TTCAGACTTAGGAATGTGCTTCCCACGTAGTGTCGTTTGTATTGGACCCTCGCA GGTGTATGAA

所述siPLK1的序列為：

siPLK1-sense:UUCAUACACCUGAAGAAGAUCACCCUCCUUAdTdT

siPLK1-antisense: UAAGGAGGGUGAUCUUCUUCAdTdT。

2.一種DNA框架納米機器人載藥體系，其特征在于，DNA框架納米機器人負載DOX。

3.一種基于生物礦化的DNA框架納米機器人，其特征在于，所述DNA框架納米機器人表面包裹二氧化硅涂層；所述二氧化硅通過雙-[γ-(三乙氧基硅)丙基]-二硫化物進行修飾。

4.一種如權利要求3所述的基于生物礦化的DNA框架納米機器人的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）DNA框架納米機器人的制備：

（a）首先將4條ssDNA鏈，每條單鏈各取適量加入到含有 1×TAE/Mg²⁺緩沖液的PE管當中，密封后，加熱反應，待反應完成后，將PE管快速冷卻，形成所需的四尾納米結構；冷藏備用；

（b）將產物四尾納米結構與單個粘性末端的 siPLK1 接頭按比例混合加入到含有1×TAE/Mg²⁺ 緩沖液的 PE管當中，密封后加熱反應，待反應完成后，將產物二DNA框架納米機器人冷藏備用；

2）DNA框架納米機器人載藥系統的制備：將 反應完成的DNA 框架納米機器人與固定量的 DOX進行共同孵育；然后，將載有 DOX 的 DNA 框架納米機器人通過離心收集負載DOX的納米顆粒；用PBS溶液洗滌幾次以除去表面上物理吸附的DOX殘留物后，儲存備用；

3）DNA框架納米機器人的礦化：將 TMAP、BDTS和 TEOS溶解在 1×TAE/Mg²⁺ 緩沖液中，然后磁力攪拌形成正 N⁺ 離子簇；將 DNA 框架納米機器人添加到溶液中攪拌，靜置反應后即可。