[發(fā)明專利]一種復合微生物菌劑及其制備方法和在防治草莓空心病中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210920265.8
• 申請日: 2022-08-02
• 公開（公告）號: CN115305221B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設計）人: 陳哲;梁宏;黃靜;李志強
• 申請（專利權）人: 山西農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 太原晉科知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 翟沖燕

本發(fā)明屬于生物防治草莓病技術領域，為了解決目前草莓空心病還沒有有效的解決問題，提供了一種復合微生物菌劑及其制備方法和在防治草莓空心病中的應用。由阿氏芽孢桿菌（Bacillus?aryabhattai）cc?2?jd的發(fā)酵液和漳州芽孢桿菌（Bacillus?zhangzhouensis）cc?4?jz的發(fā)酵液按照體積比為1:2、1:3、3:2或2:3混合而成；其中，所述阿氏芽孢桿菌、漳州芽孢桿菌保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號分別為：CGMCC?No.?23937和?CGMCC?No.?23938。制備方法簡單，在草莓促生和防病都有良好的效果。

技術領域

本發(fā)明屬于生物防治草莓病技術領域，具體涉及一種復合微生物菌劑及其制備方法和在防治草莓空心病中的應用。

背景技術

近兩年來，草莓種植區(qū)出現(xiàn)了一種新癥狀的病害，國內(nèi)多地包括北京、遼寧、河北、陜西、山東、浙江、甘肅、云南、河南等大部分草莓種植區(qū)均有發(fā)現(xiàn)，并隨著種苗的運輸?shù)纫蛩刂饾u在國內(nèi)蔓延開來，已嚴重影響我國草莓產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

在草莓種植過程中，炭疽病和根腐病是常常會出現(xiàn)的草莓病害，二者一般在草莓定植后一個月內(nèi)發(fā)病，發(fā)現(xiàn)后還可以及時補苗，挽回一定的損失；而新發(fā)現(xiàn)的這種病害發(fā)病大都是在草莓現(xiàn)蕾之后，此時已經(jīng)錯過最佳補苗階段，再加上此病害一旦發(fā)病，發(fā)病面積極大，因而由于死苗造成的損失將無法彌補。

目前，這種新癥狀病害還沒有正式的名稱，國內(nèi)還沒有機構嚴格按照植物病害認定的科赫法則做出確切答案，莓農(nóng)大多稱其為“空心病”或“斷頭病”。根據(jù)田間觀察的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)此病害最初表現(xiàn)為葉片背部出現(xiàn)不規(guī)則的斑塊（圖1），點狀發(fā)生，逐步增多；當病原菌侵染草莓莖基部后，短縮莖發(fā)生病變，內(nèi)部呈現(xiàn)水燙狀，即空心的狀態(tài)（圖2），而且用手輕輕一掰短縮莖就會斷掉，所以有了上面的空心病或斷頭病之稱。本發(fā)明將此種病害稱為空心病。

阿氏芽孢桿菌，在工業(yè)、食品業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)療方面國已有許多研究報道，包括大分子化合物降解與合成，促進植物對金屬離子、干旱與病害等逆境的耐受性。生物降解與合成功能，植物促生作用，均是阿氏芽孢桿菌分泌的酶或者活性代謝產(chǎn)物所影響的。漳州芽孢桿菌是2016年報道的一個芽孢桿菌的新物種，分離自我國漳州養(yǎng)蝦場的水中，有報道稱此菌株可以發(fā)酵桑葉粉、可以降解氨氮，也可以作為生防菌使用。

前期自患有空心病的草莓植株根部分離純化到一株病原菌，根據(jù)形態(tài)學鑒定以及分子生物學鑒定，確定此菌為棒孢新擬盤多毛孢 Neopestalotiopsis?clavispora，命名為CMSF-1，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號分別為：CGMCC?No.40205，保藏日期為2022年5月26日?。

菌株CMSF-1在PDA培養(yǎng)基上的生長狀態(tài)：菌落呈白色絲絨狀，近圓形，邊緣規(guī)則，表面呈波浪狀，后期菌落正面未見明顯的色素產(chǎn)生，菌落背面為淡橘黃色（圖3）。生長15d?后菌落上可見黑色圓形油狀小點，即為分生孢子盤。分生孢子呈紡錘形或長梭形（圖4），共5個細胞，4個隔膜，分隔處縊縮不明顯，頂端與基部細胞顏色較淡，多數(shù)呈透明狀，中間3個細胞顏色較深，多為褐色，頂端有2根不分支的附屬絲，無色透明，基部細胞具一小柄。根據(jù)形態(tài)學特征，初步判斷該病原菌屬于新擬盤多毛孢屬。

同時，我們對菌株的ITS基因序列進行測序分析，測序結(jié)果顯示菌株CMSF-1為棒孢新擬盤多毛孢 Neopestalotiopsis?clavispora（系統(tǒng)發(fā)育樹見圖5）。查詢文獻，發(fā)現(xiàn)并沒有棒孢新擬盤多毛孢會引發(fā)草莓空心病的相關報道，所以本研究將是棒孢新擬盤多毛孢導致草莓空心病的首次報道。

目前還沒有對于該病原菌的防治菌劑。

發(fā)明內(nèi)容