[發明專利]基于光學微球的快速靈敏熒光酶聯免疫檢測方法

在審

• 申請號: 202210919556.5
• 申請日: 2022-08-02
• 公開（公告）號: CN115372608A
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 曾湖烈
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/558
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;陸尤

1.一種基于光學微球的快速靈敏熒光酶聯免疫檢測方法，其特征在于，采用折射率比環境高的透明材料制成的光學微球，作為檢測載體；微球粒徑為亞毫米級別；所述微球表面經過捕獲抗體處理；利用折射率較高的微球界面的熒光非對稱發射效應，使熒光發射絕大多數光線處于折射率較高的介質中，并在微球中實現多次反射而對熒光發射實現擴增，實現ELISA的快速和靈敏檢測。

2.根據權利要求1所述快速靈敏熒光酶聯免疫檢測方法，其特征在于，所述微球材料為無機玻璃或有機高分子材料；其形狀為球形或其他能實現內反射的腔體。

3.根據權利要求2所述快速靈敏熒光酶聯免疫檢測方法，其特征在于，所述微球表面是光滑表面、粗糙表面、多孔表面和折皺表面。

4.根據權利要求3所述快速靈敏熒光酶聯免疫檢測方法，其特征在于，所述微球表面經過捕獲抗體處理，包括：

（1）微球預處理，包括去除表面有機物，表面羥基化；

（2）微球用APTES、PDITC浸泡處理，在微球表面修飾上能夠鍵合捕獲抗體的硫氰酸根；

（3）捕獲抗體并封閉微球表面非特異性結合位點。

5.根據權利要求4所述快速靈敏熒光酶聯免疫檢測方法，其特征在于，光發射檢測和酶聯免疫檢測反應為同一載體，即把檢測介質和檢測反應場所疊加透明微球上；具體步驟為：

（1）將表面經過捕獲抗體處理的微球置于20-100 μL目標檢測抗原溶液中，于37℃孵育1-10分鐘；著用TBST緩沖液沖洗3-5遍；

（2）然后把微球置于20-100μL的酶標抗體溶液中，于37 ℃孵育1-10分鐘，接著用TBST緩沖液沖洗3-5遍；

（3）最后加入20-100μL的發光底物溶液，孵育1-10分鐘，置于激光誘導熒光檢測器、熒光顯微鏡或其他熒光成像設備中，檢測微球的熒光強度。