[發(fā)明專利]用于淀粉糖發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的雙菌株及發(fā)酵方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210919355.5
• 申請日: 2022-08-02
• 公開（公告）號: CN116376735A
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉鋒;涂孝翠
• 申請（專利權(quán)）人: 吉峰久業(yè)生物科技（天津）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/56;C12N13/00;C12N15/01;C12R1/07;C12R1/225
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1.凝結(jié)芽孢桿菌，其特征在于：不耐高糖但能消耗多糖的凝結(jié)芽孢桿菌BacilluscoagulansJFJY-03，保藏編號為：CCTCC?M?20221040。

2.利用權(quán)利要求1所述的雙菌利用淀粉糖發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的發(fā)酵方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）雙菌活化

雙菌為：耐高糖但不利用多糖的德式乳酸桿菌?Lactobacillus?delbrueckii?SZ01和不耐高糖但能消耗多糖的凝結(jié)芽孢桿菌JFJY-03；

?分別將德式乳酸桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌置于LB培養(yǎng)平板上，在50±5℃的條件下于恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h活化；

2）雙菌的種子液培養(yǎng)

將位于LB培養(yǎng)平板上的德式乳酸桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌分別接種至裝有100mL種子培養(yǎng)基的250mL三角燒瓶中，于150r/min，50℃條件下在搖床培養(yǎng)24h，當(dāng)種子液pH值降至4.5±0.5，且在600nm下，檢測種子液OD值為1.2±0.2，即可認(rèn)定搖瓶種子液培養(yǎng)完成；

3）種子罐內(nèi)德式乳酸桿菌種子液培養(yǎng)

將培養(yǎng)完成的德式乳酸桿菌搖瓶種子液按10%的接種量接種至種子罐內(nèi)，于150r/min，50℃條件下培養(yǎng)，pH設(shè)定為6.8，使用質(zhì)量比為25%±5%氫氧化鈣溶液作為中和劑；

4）德式乳酸桿菌上罐發(fā)酵

將步驟3）制備的德式乳酸桿菌種子液按10%的接種量接種到發(fā)酵罐中，55℃培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150?r/min，pH設(shè)定為6.8，使用氫氧化鈣溶液作為中和劑，進(jìn)行發(fā)酵初培養(yǎng)；

發(fā)酵罐內(nèi)的發(fā)酵培養(yǎng)基為：淀粉糖（以淀粉糖內(nèi)含葡糖糖計(jì)）230g/L，硫酸銨150?g/L,磷酸二銨0.5?g/L，硫酸鋅0.5g/L；

5）種子罐內(nèi)凝結(jié)芽孢桿菌種子液培養(yǎng)

將培養(yǎng)完成的凝結(jié)芽孢桿菌搖瓶種子液按10%的接種量接種至種子罐內(nèi)，于150r/min，50℃條件下培養(yǎng)，pH設(shè)定為6.8，使用質(zhì)量比為25%±5%氫氧化鈣溶液作為中和劑；

6）凝結(jié)芽孢桿菌上罐發(fā)酵

待步驟4）發(fā)酵液內(nèi)葡萄糖的濃度降至初始葡萄糖濃度的三分之一時(shí)；將步驟5）制備的德式乳酸桿菌種子液按10%的接種量接種到步驟4）內(nèi)的發(fā)酵罐中，50℃培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150?r/min，pH設(shè)定為6.8，使用氫氧化鈣溶液作為中和劑，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙菌株利用淀粉糖發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的發(fā)酵方法，其特征在于：發(fā)酵完成后，發(fā)酵液內(nèi)L-乳酸光純≥99.9%；L-乳酸產(chǎn)酸≥17%；發(fā)酵殘?zhí)恰?.25%。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙菌株利用淀粉糖發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的發(fā)酵方法，其特征在于：步驟2）、步驟3）和步驟5）的種子液培養(yǎng)基為：葡糖糖20g/L,?硫酸銨150?g/L,磷酸二銨0.5g/L，硫酸鋅0.5g/L。

5.權(quán)利要求2所述的德式乳酸桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌利用淀粉糖發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的應(yīng)用。