[發明專利]抑制IL-25基因表達的siRNA及其應用

在審

• 申請號: 202210906988.2
• 申請日: 2022-07-29
• 公開（公告）號: CN116024212A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 李萍;唐雪明;徐維勇
• 申請（專利權）人: 硅羿科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P37/02
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

本發明公開了一種抑制IL?25基因表達的siRNA及其應用，本發明提供的siRNA序列能夠特異性敲降IL?25表達水平，本發明還通過硫代修飾正義鏈，在沒有明顯增加細胞毒性的基礎上，提高了siRNA在血清中抵抗酶水解的能力，延長作用時間，為治療自身免疫性疾病帶來重要的應用價值。

技術領域

本發明涉及一種抑制IL-25基因表達的siRNA及其應用，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

IL-25是白介素17家族的成員之一，又稱IL-17E。人IL-25全長3987bp，位于14號染色體。它的受體是IL-17RB。IL-25主要作用于高表達MHC-II、低表達CD11c的非B/非T細胞；T細胞方面，Th2型記憶細胞、NKT細胞、CD14⁺細胞也是IL-25的靶細胞。在IL-25的刺激下，NF-kB活化因子1通過細胞內SEF1R結構域結合到IL-17RB上，激活NF-kB信號通路。IL-25還可以通過胸腺基質淋巴細胞生成素(TSLP)與樹突狀細胞(DCs)之間的相互作用，促進IL-17RB的表達，增加Th2型記憶細胞的功能，發揮免疫調節作用。現有研究表明，IL-25會參與的免疫疾病至少包括銀屑病、過敏性肺炎、類風濕性關節炎、變應性肉芽腫血管炎和自身免疫性糖尿病等。所以，IL-25是自身免疫性疾病的潛在治療靶點。

siRNA的作用方式又稱RNA干擾或RNAi。siRNA通常是19～25bp的雙鏈RNA分子，其功能是誘發同源mRNA高效特異性降解，從而降低某個蛋白質的表達。細胞內存在的dsRNA，被Dicer酶(RNaseIII家族成員)識別后，剪切成siRNA片段，siRNA與細胞內其它蛋白質形成RNA介導的RISC復合物，該復合物去尋找與siRNA反義鏈同源的mRNA，在ATP作用下，Dicer酶使siRNA解螺旋，釋放正義鏈，保留反義鏈，反義鏈與mRNA特異性互補配對，RISC迅速切割這條mRNA；由于該mRNA沒有poly(A)尾巴和5’帽結構的保護，可被其它核酸酶快速水解，從而抑制了該條mRNA翻譯成蛋白質。所以，siRNA特異性降低了mRNA水平甚至蛋白水平的表達。

siRNA在生物醫藥領域中的應用有兩大難題。一個是序列特異性，另一個是易被核酸酶降解。siRNA序列可以容忍1～2個堿基與mRNA錯配，但是出現3個及以上錯配時，靶向其它非目標mRNA的幾率大大增加，而且隨著錯配堿基的出現，siRNA的干擾效率也可能下降。即設計一條特異性強的siRNA是第一個要解決的問題。其次，體外遞送siRNA進入體內，siRNA由于體內豐富的核酸酶，極易被降解代謝掉，或者產生不被期望的免疫刺激反應。將siRNA的序列進行化學修飾，能提高siRNA的穩定性，減輕負面的免疫刺激。常用的化學修飾主要包括磷酸骨架修飾、核糖修飾和堿基修飾。例如專利號CN?107904239?A中驗證過，未修飾的siRNA-RB在30分鐘后已明顯降解，而經過化學修飾的siRNA-RB在30分鐘內無明顯的降解。即設計有效的siRNA修飾且不影響敲降水平的化學修飾方法是另一個要解決的問題。

目前，在RNAi領域中，通過FDA批準上市的幾款siRNA藥物，都屬于Anlylam公司，換句話說，Anlylam公司占有siRNA藥物市場的巨大份額，且siRNA藥物研發速度快。第一款上市的藥物是2018年8月FDA批準的patisiran，用于治療轉甲狀腺素蛋白淀粉樣變性(haTTR)引起的神經損傷。正義鏈和反義鏈各包含21個核苷酸。正義鏈的19個核苷酸與反義鏈的互補19個核苷酸雜交，從而形成19個核苷酸堿基對，并在每條鏈上留下兩個3'-末端核苷酸作為未雜交的突出端，在修飾上Patisiran同時應用了2’-O-M和2’-O-Me修飾。后面陸續上市藥物還有治療急性肝卟啉癥的givosiran及治療原發性1型高草酸尿癥藥物Lumasiran。目前，國內圣諾醫藥正在加速治療增生瘢痕的siRNA藥物已經進入臨床II期。目前尚未有治療銀屑病等自身免疫疾病的siRNA藥物研發報道。本發明基于IL-25的基因序列特征設計合成的siRNA序列旨在能夠特異性敲降IL-25基因表達水平，同時對序列進行修飾以解決siRNA在血清中的穩定性問題，并避免潛在的細胞毒性，以達到可有效地改善和治療自身免疫性疾病的目標。

發明內容