[發明專利]一種抗IL-10單克隆抗體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202210906082.0
• 申請日: 2022-07-29
• 公開（公告）號: CN115925927A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 陳雨欣;陶月;吳超;耿毓;黃睿;尹盛夏;童欣
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/395;A61P31/12;A61P35/00;A61P29/00;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 南京禾祁專利代理事務所(普通合伙) 32462
• 代理人: 孫峰

本發明公開了一種抗IL?10單克隆抗體及其制備方法和應用，公開了抗IL?10單克隆抗體、抗體的制備方法、抗體在制備用于多種疾病中藥物的應用，還公開了本發明提供的抗體可配對使用檢測抗原的應用。本發明抗IL?10單克隆抗體能特異性地與IL?10抗原或sIL?10抗原結合，為通過基因工程方法診斷或治療或預防病毒感染、腫瘤或炎性疾病建立基礎；本發明抗體還可配對使用，精準測量檢測血清中的sIL?10濃度；此外本發明所述的抗IL?10單克隆抗體具有特異性抗原結合結構域，可靶向結合IL?10蛋白，也能夠用于免疫組化、ELISA等試驗。

技術領域

本發明屬于生物醫藥和基因工程技術領域，具體涉及一種抗IL-10單克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術

白細胞介素-10(interleukin-10,?IL-10)是一種多功能負性II類細胞因子，屬于同源二聚體分泌物，由兩個亞基組成，分子量大小為18kd。IL-10是一種多細胞源、多功能的調節因子，能夠調節細胞的生長分化，參與炎性反應和免疫反應，是目前公認的炎癥與免疫抑制因子。幾乎所有淋巴細胞均能合成IL-10，體內最重要的來源是單核巨噬細胞和T淋巴細胞。此外，B細胞、樹突狀細胞、NK細胞和肥大細胞等也能合成IL-10。

IL-10在先天免疫和適應性免疫中均發揮免疫抑制和免疫刺激作用，從而調節多種免疫細胞類型的反應。IL-10可以調控抗原呈遞細胞(APC)如樹突狀細胞(DC)、朗格漢斯細胞和巨噬細胞的功能。IL-10可通過增加各種受體表達，以增強單核巨噬細胞的吞噬作用，這些受體能夠與調理素或非調理素結合的病原微生物相結合并攝取入胞，IL-10刺激的單核細胞還能夠增強IgG-Fc受體表達(如CD64、CD32和CD16)，CD14樣的分子的表達。IL-10能夠有效地抑制前炎癥細胞因子的表達，也可以抑制MHC-II類分子的表達，對T細胞合成IL-2等因子也有明顯的抑制作用。調節性B細胞可通過產生IL-10抑制機體的免疫炎癥反應。（Bibby?JA等，Cholesterol?metabolism?drives?regulatory?B?cell?IL-10.NatCommun.?2020?Jul?8）。另一方面，IL-10能增強B細胞存活、增殖和抗體產生。此外，IL-10和CD4+T細胞介導的軸突切斷后神經保護機制的相互依賴性，CD4+T細胞可能會增強對IL-10的中樞反應，而CD4+T細胞內的IL-10信號傳導對于它們拯救軸突運動神經元存活的能力是必要的(Runge?EM等，CD4+T?cell?expression?of?the?IL-10?receptor.JNeuroinflammation.?2020?Apr?17)。

IL-10表達異常均可引起炎癥相關的疾病。腫瘤生長、紅斑狼瘡、淋巴瘤、皮膚癌等都屬于IL-10表達過多的疾病，而克羅恩病、銀屑病、類風濕關節炎、器官移植反應等屬于IL-10表達缺乏的疾病。因此，血清中IL-10水平對控制炎癥等某些疾病的進展至關重要，需開發其在臨床診斷和治療上的應用方式。

發明內容

有鑒于此，本發明期望提供一種抗IL-10單克隆抗體及其制備方法和應用，所提供的抗IL-10單克隆抗體可配對使用，可通過雙抗體夾心ELISA法實現對重組IL-10抗原和臨床樣本中sIL-10的精確檢測。

為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一種抗IL-10單克隆抗體，包括重鏈可變區（V_H）和輕鏈可變區（V_L）；

所述重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；

所述輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示。

進一步地，編碼上述抗IL-10單克隆抗體，其DNA序列包括重鏈可變區和輕鏈可變區的編碼DNA序列；

所述重鏈可變區的編碼DNA序列如SEQ?ID?NO:2所示；

所述輕鏈可變區的編碼DNA序列如SEQ?ID?NO:4所示。