[發明專利]一種固定化脂肪TLL酶及固體結合肽在其固定化中的應用

在審

• 申請號: 202210896280.3
• 申請日: 2022-07-28
• 公開（公告）號: CN115927288A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 李迅;季驍彥;許蕊;王飛
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N9/20;C07K19/00
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 劉峰

本發明公開了一種固定化脂肪TLL酶及固體結合肽在其固定化中的應用，采用特定類型的固體結合肽與載體進行結合，與載體結合能力弱的雜質組分可在固定化后通過緩沖液的反復洗滌去除，載體上吸附的雜質數量相對較少，達到純化的效果，有效保證了雜質的脫除效果和固定化酶的質量。本發明制備方法工藝條件溫和、能耗低、操作簡便、流程簡單，有效地克服了傳統的吸附法存在酶和固體載體表面吸附不牢，酶易流失的缺點。且通過本發明制備得到的固定化酶在熱穩定性和pH穩定性方面相較于游離酶都有了一定的提升。

技術領域

本發明屬于酶的固定化技術領域，具體涉及到一種固定化脂肪TLL酶及固體結合肽在其固定化中的應用。

背景技術

疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶(Thermomyces?lanuginosus?lipase)是一種廣泛應用于各種工業中的嗜熱脂肪酶。近幾年來，基于耐熱性脂肪酶與嗜溫菌、嗜熱菌具有良好耐熱性的特點，已經吸引了越來越多的關注。TLL脂肪酶以可溶性酶的形式在工業生物催化劑方面被用在多個不同的領域：洗滌劑、化妝品、油脂的修飾與改造、生物柴油的生產與回收、有機化學、環境保護等。但是，游離酶的工業應用往往受到長期操作穩定性差，酶的回收和再利用面臨技術阻礙的挑戰。此外，酶純化的高成本也是影響該工藝經濟可持續性的另一個關鍵因素。與游離酶相比，固定化酶在保持其高效專一及溫和的酶催化反應特性的同時，又克服了游離酶的不足之處，呈現貯存穩定性高、分離回收容易、可多次重復使用、操作連續可控、工藝簡便等一系列優點。為了實現這些目標，固定化技術成為最具創新性和研究最為廣泛的生產方法之一，以實現具有更高生產力的工業規模。

固體結合肽(Solid?binding?peptides,SBPs)是一段短的氨基酸序列，可以選擇性地識別并強烈地結合到多種固體材料的表面，包括金屬、碳素材料、硅基材料和礦物質。這些獨特的肽可以作為分子連接物，指導生物分子(如蛋白質和酶)定向固定在固體基質上，并在溫和的條件下結合相應的固體，不需要任何化學修飾陽離子或物理處理，這不僅確保了酶的完整性，而且實現了環保的生物催化過程。。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述和/或現有技術中存在的問題，提出了本發明。

因此，本發明的目的是，克服現有技術中的不足，提供一種固體結合肽在脂肪酶TLL固定化中的應用。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：

將固體結合肽與脂肪酶TLL進行整合得到融合酶；

所得融合酶與預處理后的沸石混合孵育得固定化脂肪TLL酶。

作為本發明所述的一種優選方案，其中：所述固體結合肽對沸石具有特異性吸附作用，所述脂肪酶TLL來自于疏棉狀嗜熱絲孢菌。

作為本發明所述的一種優選方案，其中：所述固體結合肽為SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列。

作為本發明所述的一種優選方案，其中：所述將固體結合肽與脂肪酶TLL進行整合為將固體結合肽通過一段柔性連接肽連接在脂肪酶TLL的C-端。作為本發明所述的一種優選方案，其中：所述柔性連接肽SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列。

作為本發明所述的一種優選方案，其中：所述沸石的載酶量為3～4U/mg。

本發明的再一目的是，克服現有技術中的不足，提供一種固定化脂肪TLL酶。

作為本發明所述的一種優選方案，其中：所述固定化脂肪TLL酶的最適儲存pH為5～9。

作為本發明所述的一種優選方案，其中：所述固定化脂肪TLL酶的最適儲存溫度為45～65℃。