[發明專利]特異性探針、基因芯片、核酸雜交組件以及試劑盒

在審

• 申請號: 202210877986.5
• 申請日: 2022-07-25
• 公開（公告）號: CN116287428A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 朱濱;邢軍芬;李洪波;張成
• 申請（專利權）人: 上海百傲科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12N15/11;C12Q1/6837;C12Q1/6816;C12R1/93
• 代理公司: 上海立群專利代理事務所(普通合伙) 31291
• 代理人: 楊楷;毛立群

本發明公開了一種鑒別非洲豬瘟(ASF)野毒株和基因缺失株的特異性探針、基因芯片、核酸雜交組件以及試劑盒，將至少1種鑒別非洲豬瘟病毒的探針結合至少2種鑒別非洲豬瘟毒株基因缺失的探針，一次性對大量序列樣品進行檢測和分析。本發明進一步將所述探針應用在基因芯片技術上，具有高通量、快速、特異性好等優勢，為創建非洲豬瘟無疫小區和貫徹落實非洲豬瘟常態化防控提供新的檢測手段。

技術領域

本發明涉及動物傳染病病原體分子檢測技術領域，尤其涉及鑒別診斷非洲豬瘟野病毒株和基因缺失株的特異性探針、基因芯片、核酸雜交組件以及試劑盒。

背景技術

非洲豬瘟(African?swine?fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(African?swinefevervirus，ASFV)感染家豬和野豬引起的一種急性、熱性和高度致死性傳染病。病死率可高達100％，為世界動物衛生組織(OIE)規定的須通報動物疫病，也是我國重點防范的一類動物疫病。

以目前國內外ASF疫苗的研究進展看，滅活疫苗和亞單位疫苗無法對免疫動物提供完全保護，減毒疫苗理論上更具可行性；由于ASFV只感染并致死豬，體外只能在豬原代巨噬細胞正常增殖，難以通過常規的傳代致弱途徑獲得安全有效減毒疫苗；通過精準敲除ASFV毒力相關基因和免疫逃逸基因，獲得安全有效ASF減毒疫苗是目前相對可行的技術路線。

目前國內外基因缺失減毒活疫苗的研究方向主要集中在B119L、DP96R、CD2v、I177L、MGF360和MGF505/530基因的敲除。國內部分豬場急于防控ASF，委托獸用疫苗生產企業、高等院校、科研機構為其非法生產ASF基因缺失減毒活疫苗，這些基因缺失毒株不僅不能保護豬群，反而會污染豬場和周邊環境，轉變成為我國ASF疫情防控中面臨的新污染源和傳播源，大大加劇了我國ASF防控的復雜性。在缺少疫苗保護的形況下，ASF目前的防控主要還是依靠嚴格的生物安全管理體系。精準可靠的檢測方法是生物安全管理體系的重要環節，然而目前市面上的非洲豬瘟病毒檢測方法大多是基于B646L單個基因建立的，檢測能力有限，無法區分ASFV野毒株和不同類型的基因缺失毒株。

發明內容

針對上述現有技術中存在的不足，本發明提供了一種鑒別診斷非洲豬瘟野病毒株和基因缺失株的特異性探針、基因芯片、核酸雜交組件以及試劑盒，可以準確鑒別ASFV野毒株和基因缺失毒株。

本發明第一方面提供了一組檢測非洲豬瘟病毒野毒株和基因缺失株的特異性探針，該特異性探針的核苷酸序列包括：

B646L探針，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；

CD2v探針，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示；

MGF360-12L探針，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示；

MGF505-3R探針，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示；以及

I177L探針，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.15所示。

在本發明的優選技術方案中，該特異性探針在5’端經過T15臂氨基化(NH2(T)15)修飾。

本發明第二方面提供了一種鑒別非洲豬瘟病毒野毒株和基因缺失株的基因芯片，該基因芯片包含固相載體以及前述特異性探針固定在固相載體上的核苷酸探針。

本發明第三方面提供了一種非洲豬瘟病毒鑒別檢測的核酸雜交組件，包含前述基因芯片和用于核酸雜交的試劑。

本發明第四方面還提供了一種非洲豬瘟病毒鑒別檢測試劑盒，包含前述基因芯片。

在本發明優選的技術方案中，該試劑盒包含下述用于擴增目標基因片段的引物組：

用于擴增B646L的目標基因片段的引物組1：上游引物的核苷酸序列如SEQ?IDNO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；