[發明專利]一種致病基因WFS1突變位點的檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202210874770.3
• 申請日: 2022-07-25
• 公開（公告）號: CN115141885A
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 韓秀群;李揚兮;張旭峰
• 申請（專利權）人: 浙江麥大基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 寧波市鄞州盛飛專利代理事務所(特殊普通合伙) 33243
• 代理人: 王玲華

1.一種檢測WFS1突變的引物系列，其特征在于所述引物系列包括擴增WFS1第2-8外顯子序列的引物對，其堿基序列分別為:

擴增WFS1第2外顯子序列的引物對：

WFS1-Exon2-F:ttttctgtctccagcagacactaa

WFS1-Exon2-R:ccacccagctatccctgaacatc；

擴增WFS1第3外顯子序列的引物對：

WFS1-Exon3-F:agcagatctgaagaccctcatgc

WFS1-Exon3-R:ggaaaactggcacagtgaacatgg；

擴增WFS1第4外顯子序列的引物對：

WFS1-Exon4-F:tgacaaagggaagtgggtgaaag

WFS1-Exon4-R:caccagcgttaggtttggtaagattt；

擴增WFS1第5和第6外顯子序列的引物對：

WFS1-Exon56-F:cgcgatgtcctcttgagtcag

WFS1-Exon56-R:tgggaggcacgggtgagata；

擴增WFS1第7外顯子序列的引物對：

WFS1-Exon7-F:gcccatgctgttttctctcatgc

WFS1-Exon7-R:acggctgtaagacactctttgttagg；

擴增WFS1第8外顯子序列的引物對1：

WFS1-Exon8-F1:cctcgttcccacgtaccatctt

WFS1-Exon8-R1:ccatcgaccagtgccatttcttc；

擴增WFS1第8外顯子序列的引物對2：

WFS1-Exon8-F2:tcatcttctccttccccatcgcc

WFS1-Exon8-R2:ccaggatgaagcttgaccatgga；

擴增WFS1第8外顯子序列的引物對3：

WFS1-Exon8-F3:tctctggagctcaccaagatcgc

WFS1-Exon8-R3:gcatgcccacggtaatctcaaa；

擴增WFS1第8外顯子序列的引物對4：

WFS1-Exon8-F4:ctgccacatcaagaagttcgacc

WFS1-Exon8-R4:gtattcagagtggacagagctacaca。

2.一種致病基因WFS1突變位點的檢測方法，其特征在于所述檢測方法包括以下步驟：

(1)提取外周血中的基因組DNA；

(2)利用WFS1基因第2-8外顯子引物對擴增步驟(1)中提取的DNA；

(3)對步驟(2)中的擴增產物進行測序；

(4)對測序結果進行比對，確定WFS1基因是否發生突變。

3.如權利要求2所述一種致病基因WFS1突變位點的檢測方法，其特征在于所述步驟(1)中抽提外周血中的基因組DNA可采用商業的試劑盒，優選為血液基因組DNA抽提試劑盒，由生工生物工程(上海)股份有限公司生產。

4.如權利要求2所述一種致病基因WFS1突變位點的檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中PCR擴增的擴增體系中添加了DMSO；所述DMSO添加的體積占總擴增體系體積的5％-10％，優選5.2％。

5.如權利要求2所述一種致病基因WFS1突變位點的檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中PCR擴增的擴增體系為：

6.如權利要求2所述一種致病基因WFS1突變位點的檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中PCR擴增的擴增條件：