[發明專利]一種降解甲基汞的重組菌株及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 202210874009.X
• 申請日: 2022-07-21
• 公開（公告）號: CN115895986A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發明（設計）人: 陰永光;楊青青;郭瑛瑛;向玉萍
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態環境研究中心
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/60;A62D3/02;C12R1/19
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 喬獻麗

1.重組菌株，其能夠降解甲基汞，其特征在于，所述重組菌株包含merB基因序列和與所述merB基因序列可操作地連接的組成型啟動子。

2.根據權利要求1所述的重組菌株，其特征在于，所述merB基因序列如SEQ?ID?NO:9所示，任選地，所述組成型啟動子選自BBa_J23119、BBa_J23104、BBa_J23105、BBa_J23106和BBa_J23107，所述BBa_J23119的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11所示，所述BBa_J23104的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:12所示，所述BBa_J23105的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:13所示，所述BBa_J23106的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:14所示，所述BBa_J23107的核苷酸序列如SEQ?IDNO:15所示，優選地，所述重組菌株為大腸桿菌。

3.重組菌株，其能夠降解甲基汞，其特征在于，所述重組菌株是大腸桿菌菌株，保藏號為CGMCC?No.25204。

4.降解甲基汞的重組菌株的制備方法，其包括以下步驟：

a.構建包含merB基因序列和與所述merB基因序列可操作地連接的組成型啟動子的表達載體，任選地，所述組成型啟動子選自BBa_J23119、BBa_J23104、BBa_J23105、BBa_J23106和BBa_J23107，所述BBa_J23119的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11所示，所述BBa_J23104的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:12所示，所述BBa_J23105的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:13所示，所述BBa_J23106的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:14所示，所述BBa_J23107的核苷酸序列如SEQ?IDNO:15所示；

b.將所述表達載體導入宿主細胞例如大腸桿菌中；

c.取陽性菌落進行菌落PCR，并測序驗證，得到重組菌株。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述merB基因序列如SEQ?ID?NO:9所示。

6.重組菌株，其特征在于，所述重組菌株根據權利要求4或5所述的方法制備。

7.菌劑，其特征在于，所述菌劑包含根據權利要求1-3、6中任一項所述的重組菌株。

8.根據權利要求1-3、6中任一項所述的重組菌株或根據權利要求7所述的菌劑在降解甲基汞中的應用。

9.降解甲基汞的方法，其特征在于，包括向待處理環境中施加根據權利要求1-3、6中任一項所述的重組菌株或根據權利要求7所述的菌劑，任選地，所述待處理環境為缺氧或有氧環境，例如缺氧或有氧沉積物。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，降解缺氧或有氧沉積物中甲基汞的步驟包括：

對于缺氧或有氧沉積物中新生成的甲基汞，加入所述重組菌株直接降解；對于沉積物中老化后的甲基汞，生物可利用性高的部分加入所述重組菌株直接降解；對沉積物中老化后的甲基汞生物可利用性低的部分加入硫代硫酸銨提取，提取后直接在沉積物-硫代硫酸銨體系中加入所述重組菌株降解沉積物中的甲基汞，或將沉積物體系分離出提取液和沉積物固體，將所述重組菌株加入提取液中異位降解沉積物中的甲基汞。