[發明專利]游離脂肪酸（NEFA）檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202210873695.9
• 申請日: 2022-07-21
• 公開（公告）號: CN115109831A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 田佳樂
• 申請（專利權）人: 北京安圖生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/25
• 分類號: C12Q1/25;C12Q1/26;C12Q1/28
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳

本發明涉及體外診斷技術領域，特別涉及游離脂肪酸(NEFA)檢測試劑盒。本發明提供了1?(4?磺酸苯基)?3?乙氧羰基?5?吡唑酮、輔酶A鋰鹽、2?羥基吡啶?N?氧化物和酶保護劑在提高游離脂肪酸檢測試劑或試劑盒的反應度、準確度和穩定性中的應用。實驗表明本發明的試劑盒定標反應度更高，回收試驗更接近100％、37℃處置14天檢測數據偏差小于5％。

技術領域

本發明涉及體外診斷技術領域，特別涉及游離脂肪酸(NEFA)檢測試劑盒。

背景技術

游離脂肪酸(Free fatty acid，FFA)，也稱非酯化脂肪酸(Nonesterified fattyacid，NFFA)，臨床上一般是指C10以上的脂肪酸，是脂肪代謝的中間產物，同時也是合成細胞膜脂質結構和前列腺素的供體以及機體能量代謝的重要能源物質之一。正常血清中的游離脂肪酸主要包括油酸(Oleic acid，占54％)、軟脂酸(Palmitic acid，占34％)、硬脂酸(Stearic acid，占6％)等，其與清蛋白結合在血液中運輸。

目前，血中游離脂肪酸可反映人體脂肪代謝情況及血脂水平。NEFA增高多見于肥胖，糖尿病，甲狀腺機能亢進，心肌梗塞，肢端肥大癥，嚴重肝病和饑餓；NEFA降低見于甲狀腺機能減退，腦垂體功能不全，阿狄森氏病。餐后可引起生理性降低。由于NFFA在糖尿病(Diabetes mellitus，DM)、心血管病(Angiocardiopathy，CD)等疾病的發病機理及作用方面的重要意義，針對NEFA作用的研究已經成為臨床醫學領域的研究熱點。

血清NFFA的測定方法主要有滴定法、比色法、化學發光法、氣相色譜和酶法。由于前兩種方法準確性差，操作繁瑣，除個別小醫院以外已不再使用。另外，雖然目前有個別公司對比色法進行了改進，但是依然要手工操作，接觸氯仿甲醇等有毒有機溶劑。而由于高效液相色譜儀和氣相色譜法儀太昂貴，不便于批量操作。相對而言，酶法測定不但結果準確可靠快速，且易于批量檢測，因此目前一般多以酶法測定，可分別測定產物乙酰CoA、AMP或輔酶A(CoA)，進行定量。

市售酶法測定游離脂肪酸試劑盒的主要反應原理大都基于Trinder反應模式，具體反應過程如下：

普遍的NEFA試劑盒的R1試劑和R2試劑組成成分為：

R1試劑：

R2試劑：

在2011年以前，生產酶法NEFA的試劑盒廠家均為外國廠家，進口試劑具有良好的穩定性和優秀的分析性能，但價格昂貴，檢測成本較高，不適合大規模應用。目前國內廠家所采用的色原反應物質活性低，顯色穩定性差、抗干擾性弱，從而導致整個試劑盒穩定性差，檢測結果不準確，靈敏度低。

含有過氧化物酶和酰基輔酶A氧化酶的試劑R2，成分比較復雜含有多種酶，其穩定性與酶活性相關，而酶的活性易受各種因素的干擾，比如pH、溫度、紫外線、重金屬鹽、抑制劑、激活劑等，且由于酶含量過大，易產生沉淀。由此，研制一種酶活性穩定、不易沉淀、制備簡單、成本低廉游離脂肪酸測定試劑盒是游離脂肪酸測定領域亟需解決的一個問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了游離脂肪酸(NEFA)檢測試劑盒，其反應度高，線性好。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了1-(4-磺酸苯基)-3-乙氧羰基-5-吡唑酮作為色原在避免游離脂肪酸檢測試劑或試劑盒中輔酶A的干擾中的應用。

本發明還提供了1-(4-磺酸苯基)-3-乙氧羰基-5-吡唑酮和輔酶A鋰鹽在提高游離脂肪酸檢測試劑或試劑盒的反應度和準確度中的應用。