[發明專利]一種靶向雞甲基化轉移酶基因METTL16的siRNA、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202210859712.3
• 申請日: 2022-07-20
• 公開（公告）號: CN115948391B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 單艷菊;束婧婷;章明;姬改革;劉一帆;巨曉軍;屠云潔;鄒劍敏;盛中偉;肖芹;張海濤;韋濤
• 申請（專利權）人: 江蘇省家禽科學研究所;江蘇立華育種有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/48;C12N15/11
• 代理公司: 南京源點知識產權代理有限公司 32545
• 代理人: 王佳妹

本發明公開了靶向雞甲基化轉移酶基因METTL16的siRNA及其應用，其正義鏈的序列為5’?CUCACACGGAAUUCUGUCA?3’，反義鏈的序列為5’?UGACAGAAUUCCGUGUGAG?3’。同時，本發明還公開了含有特異性敲降雞METTL16基因表達的siRNA的試劑盒，以及含有編碼特異性敲降雞METTL16基因表達的siRNA的核苷酸序列的重組表達載體、轉基因細胞系或重組菌。本發明的siRNA通過特異性干擾雞METTL16基因表達來鑒定基因功能，可應用于優質雞的遺傳育種以及為人類疾病研究提供參考數據，具有很大的經濟價值和科研價值。

技術領域

本發明屬于siRNA技術領域，涉及靶向雞甲基化轉移酶METTL16基因的siRNA、試劑盒及其應用。

背景技術

肌纖維是肌肉的基本構成單位，不同肌纖維類型組成賦予了不同肌肉群特定的生理特性和功能。肌纖維類型不僅與運動、肌肉代謝疾病(如肥胖癥、2型糖尿病、肌肉萎縮等)密切相關，還與畜禽肉品質有著密切聯系。總體上，慢肌纖維含量多的肌肉品質要優于快白肌纖維含量多的肌肉。

研究表明，RNA甲基化修飾，尤其是N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladen?osine,m6A)是真核生物體內廣泛存在的RNA水平表觀遺傳修飾，在細胞分化、發育和壓力應答等多種生理功能中均有重要作用。參與m6A甲基化修飾的酶有甲基化轉移酶(Writers)、去甲基化酶(Erasers)和甲基化閱讀蛋白(Readers)，其中甲基化轉移酶上保守的motif能催化RNA上的腺苷酸發生m6A甲基化修飾，而去甲基化酶主要作用是對已經發生m6A修飾的堿基進行去甲基化修飾，閱讀蛋白主要功能是識別發生m6A修飾的堿基，從而激活下游的調控通路如RNA降解、miRNA加工等。研究表明，RNA?m6A修飾在雞肌纖維類型形成及轉化中可能發揮重要作用。

雞一直是生命科學研究中極有價值的模式動物。在雞骨骼肌中開展肌纖維類型形成及轉化的分子遺傳學基礎研究，其成果不僅對提升我國家禽產品的市場競爭力具有重要意義，而且對于揭示人類骨骼肌代謝功能異常引起的肌肉相關疾病的分子機理也具有很好的借鑒價值。但是現有技術中并未有利用siRNA干擾雞甲基化轉移酶METTL16基因表達的相關報道。

發明內容

為了克服現有技術中存在的缺陷，本發明提供了靶向雞甲基化轉移酶基因METTL16的siRNA、試劑盒及其應用。

第一方面，本發明提供了一種靶向雞甲基化轉移酶基因METTL16的siRNA，其特征在于，所述siRNA的正義鏈的序列為5’-CUCACACGGAAUUCUGUCA-3’(SEQ?NO.1)，反義鏈的序列為5’-UGACAGAAUUCCGUGUGAG-3’(SEQ?NO.2)。

進一步地，所述正義鏈和反義鏈的3’端還添加有兩個垂懸堿基dT。

第二方面，本發明提供了含有編碼本發明第一方面所述的靶向雞甲基化轉移酶基因METTL16的siRNA的核苷酸序列的重組表達載體、轉基因細胞系或重組菌。

第三方面，本發明還提供了一種含有本發明第一方面所述的靶向雞甲基化轉移酶基因METTL16的siRNA的試劑盒。

進一步地，所述試劑盒還包括用于檢測雞甲基化轉移酶基因METTL16表達的引物組。

第四方面，本發明還提供了本發明第一方面所述的siRNA、本發明第二方面所述的重組表達載體、轉基因細胞系或重組菌、本發明第三方面所述的試劑盒在鑒定雞甲基化轉移酶基因METTL16功能中的應用。

本發明相對于現有技術而言，提供了一種能夠靶向雞甲基化轉移酶基因METTL16的siRNA，將其轉入雞成肌細胞后可以有效降低雞甲基化轉移酶基因METTL16的表達，抑制效率達到50％以上，可見其敲降效率很高。本發明的siRNA通過特異性敲降雞甲基化轉移酶基因METTL16的表達來鑒定基因功能，可應用于優質雞的遺傳育種以及為人類疾病研究提供參考數據，具有很大的經濟價值和科研價值。