[發明專利]一種酵母培養物中甘露聚糖含量的測定方法

在審

• 申請號: 202210853900.5
• 申請日: 2022-07-20
• 公開（公告）號: CN115452965A
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 李雙全;胡志琦;童志峰;何月;韋優
• 申請（專利權）人: 湖北綠科樂華生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
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本發明公開了一種酵母培養物中甘露聚糖含量的測定方法，通過以甘露聚糖為標準品，用處理樣品的方法處理甘露聚糖，步驟一致，方法一致，無需轉換系數，測試結果更準確，優于以甘露糖作標準品，可明確減小誤差，其原理為：同一時刻進入色譜柱的各組分，由于在流動相和固定相之間溶解、吸附、滲透或離子交換等作用的不同，隨流動相在色譜柱兩相之間進行反復多次的分配，由于各組分在色譜柱中的移動速度不同，經過一定長度的色譜柱后，彼此分離開來，按順序流出色譜柱，進入信號檢測器，在記錄儀上或數據處理裝置上顯示出各組分的譜峰數值，根據保留時間對照定性，根據峰面積計算樣品中的甘露聚糖含量。

技術領域

本發明涉及甘露聚糖測定技術領域，具體為一種酵母培養物中甘露聚糖含量的測定方法。

背景技術

甘露聚糖是一種既經濟又高效的天然食品防腐劑，能有效地防止食品腐敗變質、發霉和遭受蟲害，是高度分支的多聚體，廣泛存在與多種生命形式中的物質，性狀為無色、無毒、無異味。甘露聚糖是酵母培養物的主要成分，也是酵母培養物生產企業必需要檢測的成分之一。目前對酵母培養物中甘露聚糖含量的測定主要采用“柱前衍生高效液相包譜法”，該方法的主要步驟為：（1）對酵母培養物進行預處理使其中的酵母細胞壁破壁；（2）對預處理后的樣品在酸性條件下進行水解反應；（3）樣品水解反應后的溶液酸堿度調成中性后，與相應的衍生化試劑在一定條件下進行衍生化反應，同時甘露糖標準溶液在相同條件下進行衍生化反應；（4）以甘露糖為標準品溶液，衍生化后的樣品和衍生化后的標準品溶液經反相高效液相色譜進行分析檢測；（5）根據得到的色譜數據計算出樣品中甘露糖的質量，再換算成甘露聚糖的含量。在此方法中，以甘露聚糖為標準，需先對樣品進行甘露糖含量的測定后再通過換算才能得到甘露聚糖含量，這無疑對后續測試結果造成影響，影響結果的準確性，誤差較大，所以這里提出甘露聚糖含量的測定來解決現有技術的不足。

發明內容

本發明解決的技術問題在于克服現有技術的缺陷，提供一種酵母培養物中甘露聚糖含量的測定方法。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：甘露聚糖含量的測定，包括以下步驟：

S1：標準溶液的制備；準確稱取100mg甘露聚糖于10mL離心管中,加入6mL濃鹽酸，于旋渦混合器上混合2min，充分混勻，將離心管置于30℃恒溫水浴鍋中3h，每間隔30min用旋渦混合器振蕩混合2min；將溶液轉入100mL錐形瓶中，用約50mL超純水洗滌試管數次，并將洗滌液全部轉入錐形瓶中，將錐形瓶置于高壓蒸氣滅菌鍋中101℃水解3h；水解液冷卻至室溫后，用氫氧化鈉溶液調節pH值為中性，超純水定容至100mL；取適量用中速定性濾紙過濾，再將過濾后的溶液用超純水稀釋成20.0，40.0，60.0，80.0，100，250.0μg/mL的系列標準工作溶液；

S2：樣液的制備；準確稱取0.5-1.5g樣品適量于10mL離心管中，加入6mL濃鹽酸，于旋渦混合器上混合2min，使樣品充分混勻，將離心管置于30℃恒溫水浴鍋中3h，每間隔30min用旋渦混合器振蕩混合2min；將全部樣品溶液轉入100mL錐形瓶中，用約50mL超純水洗滌試管數次，并將洗滌液全部轉入錐形瓶中，將錐形瓶置于高壓蒸氣滅菌鍋中101℃水解3h；水解液冷卻至室溫后，用氫氧化鈉溶液調節pH值為中性，定容至100mL。取適量用中速定性濾紙過濾，此為供試品溶液；

S3：色譜條件；

S4：繪制標準曲線；

S5：樣品的測定；

S6：結果計算。

優選的，步驟1中微量進樣器的容積為100ul，稱重用的是儀器為分析天平，且分析天平的精度為0.1mg。