[發(fā)明專利]一種膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210851250.0
• 申請日: 2022-07-19
• 公開（公告）號: CN115125206A
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙俊伊;趙月;劉思雨;陳雪貞;朱凱川;項(xiàng)賢媛;祝心舟
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N5/09;C12Q1/02;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/574;G01N21/64
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

本發(fā)明公開了一種膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。所述方法包括：取實(shí)驗(yàn)動物或人的離體大腦組織，使用組織切片機(jī)進(jìn)行切片，得到腦切片，將所述腦切片置于支撐介質(zhì)上進(jìn)行培養(yǎng)，然后將膠質(zhì)瘤細(xì)胞接種至培養(yǎng)后的腦切片中并進(jìn)行培養(yǎng)，得到所述膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型。所述膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型維持了腦組織區(qū)域間的神經(jīng)連接、多種神經(jīng)遞質(zhì)活性、神經(jīng)可塑性和神經(jīng)元?膠質(zhì)細(xì)胞互作等特點(diǎn)，能夠較為完善地保存腦組織細(xì)胞的功能，從而提供接近體內(nèi)的腫瘤微環(huán)境，為靶向膠質(zhì)瘤藥物的精準(zhǔn)篩選提供有力的工具。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

膠質(zhì)瘤(glioma)是最為常見的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤，目前膠質(zhì)瘤的治療以手術(shù)切除為主，輔以化療、放療等手段，但對高級別膠質(zhì)瘤治療效果差，復(fù)發(fā)率高，因此亟需開發(fā)新型治療手段。

由于膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有高度異質(zhì)性和代謝復(fù)雜性，因此在治療膠質(zhì)瘤的小分子藥、抗體藥、基因治療和細(xì)胞治療藥物的研發(fā)過程中，合適的模型對藥物研發(fā)成功率至關(guān)重要。

體外細(xì)胞模型適合藥物高通量篩選，但膠質(zhì)瘤的體外培養(yǎng)的條件與體內(nèi)差異巨大，缺乏體內(nèi)腫瘤微環(huán)境中與神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞等異種細(xì)胞間的相互作用，因此篩選出的藥物往往在動物體內(nèi)模型中無法通過有效性驗(yàn)證。而直接利用裸鼠或免疫缺陷鼠的膠質(zhì)瘤原位移植模型的效率低、成本高，多用于少量候選藥物的藥理藥效驗(yàn)證，而難以直接用于藥物篩選，如CN108186681A公開一種人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞SCID鼠大腦移植瘤模型的構(gòu)建方法。相比之下，組織器官水平的體外模型比整體動物模型顯著降低了篩選成本，提高篩選效率，同時能在較大程度上保持細(xì)胞培養(yǎng)模型不具備的組織內(nèi)細(xì)胞間微環(huán)境，用于藥物篩選更能反映接近體內(nèi)的藥理作用，并能同時驗(yàn)證藥物對周圍正常組織細(xì)胞的副作用。然而，當(dāng)前膠質(zhì)瘤與腦組織器官共培養(yǎng)模型仍較為缺乏，很大程度上限制了靶向藥物的開發(fā)。

綜上所述，提供一種以組織器官培養(yǎng)物為受體的膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型是膠質(zhì)瘤藥物開發(fā)領(lǐng)域亟待解決的問題之一。

發(fā)明內(nèi)容

針對目前膠質(zhì)瘤體外藥物篩選缺乏有效腦組織器官共培養(yǎng)模型的問題，本發(fā)明提供一種膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，該膠質(zhì)瘤的體外共培養(yǎng)模型將彌補(bǔ)膠質(zhì)瘤細(xì)胞模型和動物模型間過渡的空白，在驗(yàn)證靶向藥物對膠質(zhì)瘤的藥理作用的同時檢驗(yàn)靶向藥物對膠質(zhì)瘤周圍正常細(xì)胞的毒副作用，為靶向膠質(zhì)瘤藥物的精準(zhǔn)篩選提供有力的工具。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供一種構(gòu)建膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型的方法，所述方法包括：

取實(shí)驗(yàn)動物或人的離體大腦組織，使用組織切片機(jī)進(jìn)行切片，得到腦切片，將所述腦切片置于支撐介質(zhì)上進(jìn)行培養(yǎng)，然后將膠質(zhì)瘤細(xì)胞接種至培養(yǎng)后的腦切片中并進(jìn)行培養(yǎng)，得到所述膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型。

本發(fā)明中，首次利用保留完整腦組織細(xì)胞的腦切片，設(shè)計(jì)合理培養(yǎng)及接種策略，構(gòu)建體外膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型，所述體外膠質(zhì)瘤體外共培養(yǎng)模型能夠有效模擬體內(nèi)膠質(zhì)瘤環(huán)境，在驗(yàn)證靶向藥物對膠質(zhì)瘤的藥理作用的同時檢驗(yàn)靶向藥物對膠質(zhì)瘤周圍正常細(xì)胞的毒副作用，為靶向膠質(zhì)瘤藥物的精準(zhǔn)篩選提供有力的工具。

本發(fā)明中，可根據(jù)需求對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行選擇，不作特殊限制。

本發(fā)明中，所述實(shí)驗(yàn)動物可選自大鼠、小鼠或豬。

本發(fā)明中，可根據(jù)需求選擇腦切片的厚度和面積，不作特殊限制。

本發(fā)明中，所述腦切片的厚度可以為300～400μm，包括但不限于302μm、304μm、306μm、308μm、310μm、320μm、340μm、360μm、370μm、380μm、390μm、392μm、395μm、396μm、398μm或399μm。