[發(fā)明專利]具有犬自然殺傷細(xì)胞體外激活功能的組合物及體外培養(yǎng)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210846301.0
• 申請日: 2022-07-19
• 公開（公告）號: CN115125204B
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙獻(xiàn)軍;魏強(qiáng);馬櫻琬;田方杰;白春娜;張翊華
• 申請（專利權(quán)）人: 百歐派（天津）生物技術(shù)有限公司;西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京潤平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 趙澤麗

1.一種犬自然殺傷細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括：將犬外周血單個核細(xì)胞與具有犬自然殺傷細(xì)胞體外激活功能的組合物混合進(jìn)行激活培養(yǎng)，將激活培養(yǎng)后的細(xì)胞進(jìn)行分離和擴(kuò)增；

其中，具有犬自然殺傷細(xì)胞體外激活功能的組合物由RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、滅活的A群鏈球菌(Streptococcus?pyogenes)、糖皮質(zhì)激素、人白介素2、人白介素15、CD335單克隆抗體和CD16單克隆抗體組成；具有犬自然殺傷細(xì)胞體外激活功能的組合物中，RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清的體積比為9：1，相對于總量為1mL的RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清，所述滅活的A群鏈球菌的含量為0.01KE、糖皮質(zhì)激素的含量為3.7μg、人白介素2的含量為100IU、人白介素15的含量為10ng、CD335單克隆抗體的含量為50ng、CD16單克隆抗體的含量為50ng；所述糖皮質(zhì)激素為氫化可的松；

所述擴(kuò)增使用的培養(yǎng)液由人白介素2、人白介素15、RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清組成；所述擴(kuò)增使用的培養(yǎng)液中，RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清的體積比為9：1，相對于總量為1mL的RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清，人白介素2的含量為1000IU；人白介素15的含量為10ng。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述滅活的A群鏈球菌為沙培林。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述具有犬自然殺傷細(xì)胞體外激活功能的組合物的用量使得犬外周血單個核細(xì)胞在混合體系中的初始細(xì)胞密度≥3×10⁶個細(xì)胞/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述激活培養(yǎng)的條件包括：飽和濕度，溫度為36-38℃，CO₂含量為5-10％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述擴(kuò)增的條件包括：飽和濕度，溫度為36-38℃，CO₂含量為5-10％。