[發明專利]一種斑馬魚心肌缺氧模型的建立方法及應用

有效

• 申請號: 202210828378.5
• 申請日: 2022-07-13
• 公開（公告）號: CN115250971B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 夏青;張云;劉可春;周超藝;王雪;王榮春;李曉彬;張華錚
• 申請（專利權）人: 山東省科學院生物研究所;山東宏濟堂制藥集團股份有限公司
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10
• 代理公司: 濟南竹森知識產權代理事務所(普通合伙) 37270
• 代理人: 朱洪菊

1.一種斑馬魚心肌缺氧模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)挑選發育正常的3dpf斑馬魚，隨機分為空白對照組和模型組，斑馬魚培養密度為4-6條/mL斑馬魚培養用水，模型組置于空氣氧含量按體積分數計為0.1％以下的條件下培養，培養時間為1.5-4.5h，培養溫度為26-30℃；空白對照組在空氣正常含氧條件下培養，其余實驗條件均與模型組保持一致；

(2)麻醉步驟(1)中培養結束的斑馬魚，記錄斑馬魚15-60s心跳次數，計算心率，并對斑馬魚進行錄像保存；

(3)利用圖像處理軟件分別統計步驟(2)中，斑馬魚收縮末期與舒張末期的心室短軸長度和心室長軸長度，計算心室短軸縮短率、射血分數、心搏量；

(4)利用數據處理軟件分析數據，分析比較空白對照組與模型組差異的顯著性，與空白對照組相比，若模型組斑馬魚心率、心室短軸縮短率、射血分數和心搏量都降低，并有顯著差異，則模型組構建成功，得到斑馬魚心肌缺氧模型。

2.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟(1)中，斑馬魚培養密度為4條/mL斑馬魚培養用水。

3.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟(1)中模型組置于厭氧培養盒中培養，盒內空氣中的氧含量按體積分數計＜0.1％。

4.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟(1)中，所述斑馬魚培養用水配方為：5mMNaCl，0.17mM?KCl，0.33mM?CaCl₂，0.33mM?MgSO₄·7H₂O，按體積分數計3％苯硫脲溶液，所述苯硫脲溶液的摩爾濃度為6.57mM。

5.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟(1)中培養時間為2.5h。

6.如權利要求1所述方法，其特征在于，步驟(4)中，利用數據處理軟件分析數據，分析比較空白對照組與模型組差異的顯著性，與空白對照組相比，模型組斑馬魚同時達到心率降低4.5％以上，心室短軸縮短率降低35％以上、射血分數降低25％以上、心博量降低35％以上，則模型組構建成功，得到斑馬魚心肌缺氧模型。

7.如權利要求6所述方法，其特征在于，步驟(4)中，與空白對照組相比，模型組斑馬魚同時達到心率降低5-27％，心室短軸縮短率降低36-69％、射血分數降低30-52％、心博量降低41-72％，則模型組構建成功，得到斑馬魚心肌缺氧模型。

8.權利要求1-7任一項所述方法制備的斑馬魚心肌缺氧模型在評價治療心肌缺氧藥物質量中的應用。

9.如權利要求8所述應用，其特征在于，所述斑馬魚心肌缺氧模型在評價化學藥物、中藥單體化合物、中藥提取物質量中的應用。

10.如權利要求9所述應用，其特征在于，所述斑馬魚心肌缺氧模型在評價依達拉奉、丹酚酸B、心可舒片質量中的應用。