[發明專利]用于轉基因抗草甘膦棉花ZD131特異性鑒定分子標記的引物組及其應用

在審

• 申請號: 202210826366.9
• 申請日: 2022-07-13
• 公開（公告）號: CN116064887A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 祝水金;王宛如;曹躍芬;盛況;趙天倫;陳進紅
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林超

1.一種用于轉基因抗草甘膦棉花ZD131特異性鑒定分子標記的引物組，其特征在于：

所述的引物組包括兩對引物，分別為引物對ZD131LB和引物對ZD131RB；

引物對ZD131LB的序列為：5’-ACAGTTAGGGGCAAAATCAGA-3’和5’-TCTAAGCCCCCATTTGGACG-3’，分別如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2；

引物對ZD131RB的序列為：5’-?TGACCATGATGCATGTGCTGG?-3’和5’-AAATGGCCTCCATTATTTGGCT?-3’，分別如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4。

2.權利要求1所述引物組的應用，其特征在于：在轉基因抗草甘膦棉花ZD131特異性分子標記和鑒定中的應用。

3.根據權利要求3所述引物組的應用，其特征在于：所述的轉基因抗草甘膦棉花ZD131具體為轉基因抗草甘膦棉花，取名為轉基因抗草甘膦棉花ZD131，轉基因抗草甘膦棉花ZD131是在棉花基因組中插入外源基因而獲得，外源基因是由兩個序列相同的抗草甘膦基因CP4?EPSPS串聯構成，抗草甘膦基因CP4?EPSPS的基因序列如SEQ?ID?NO.5。

4.應用于權利要求1或2所述引物組的鑒定方法，其特征在于：

1）使用CTAB法分別提取待測棉花的葉片DNA；

2）使用引物對ZD131LB和引物對ZD131RB對提取到的葉片DNA進行PCR擴增，并以UBQ為內參基因監測DNA質量；

3）PCR擴增產物使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳，經GelRed核酸染料浸染后，由凝膠成像儀紫外曝光顯色，并拍照；

4）通過檢測引物對ZD131LB和ZD131RB對ZD131株系基因組處理后是否擴增出目的片段條帶，若擴增出則為轉基因抗草甘膦棉花ZD131，否則不為轉基因抗草甘膦棉花ZD131。

5.根據權利要求4所述的引物組的鑒定方法，其特征在于：

所述步驟2）中，PCR擴增的擴增體系為50?μL，包含50ng?DNA、每種dNTP各0.2mM?、每條引物各0.4μM、0.2U?Taq?DNA?polymerase；擴增條件為94℃預變性3min，熱循環體系為94℃變性30s、58℃退火30s、72℃延伸1min，循環數為30個，最后72℃延伸5?min。