[發明專利]用于對蝦急性肝胰腺壞死病和肝腸胞蟲的檢測的引物探針組合、試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202210823399.8
• 申請日: 2022-07-14
• 公開（公告）號: CN115044691A
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 李家僑;謝艷輝;張娜;李獻鋒;劉葒;鄭曉聰;唐媛媛;劉驍;斯澤恩;鄭舒尹
• 申請（專利權）人: 湛江海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/63;C12R1/645
• 代理公司: 北京市廣友專利事務所有限責任公司 11237
• 代理人: 張仲波

本發明提供了一種用于檢測對蝦急性肝胰腺壞死病和肝腸胞蟲的引物探針組合，其包含：針對急性肝胰腺壞死病特征序列的第一引物組；針對肝腸胞蟲特征序列的第二引物組；所述急性肝胰腺壞死病特征序列為pirA^VP基因序列；所述肝腸胞蟲特征序列為肝腸胞蟲的SWP1基因序列。本發明還提供了其在檢測對蝦急性肝胰腺壞死病和肝腸胞蟲感染中的應用，以及檢測試劑盒。本發明提供的引物探針組合和試劑盒不僅可以檢測急性肝胰腺壞死病，還可以用于肝腸胞蟲，或者同時檢測上述兩種疾病，特異性強、靈敏度高。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術領域，具體涉及用于對蝦急性肝胰腺壞死病和肝腸胞蟲的雙重熒光PCR檢測的引物探針組合及試劑盒。

背景技術

急性肝胰腺壞死病(Acute hepatopannecrosis disease,AHPND)是由副溶血性弧菌攜帶的質粒編碼PirA^VP和PirB^VP毒素基因引起的一種對蝦疾病。由于該疫病在早期(投苗30d左右)會引起蝦苗不尋常的高死亡率而被稱之為早死綜合征(EMS)，該病在全球蝦類主要養殖地區肆虐，給越南、中國、馬來西亞、泰國、墨西哥和菲律賓等國對蝦產業帶來巨大損失?；疾ξr主要臨床癥狀表現為肝胰腺萎縮、顏色變淺，空腸空胃，甲殼變軟，失去活力等，常為急性死亡，死亡率高達100％。

蝦肝腸胞蟲(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)于2009年在泰國養殖的生長緩慢的斑節對蝦中首次被分離和命名，屬于微孢子蟲科、腸胞蟲屬。EHP主要寄生于對蝦肝胰腺小管的上皮細胞內，已被證實與對蝦生長緩慢關系密切。EHP流行已經對印度、泰國、中國、越南、馬來西亞、印度尼西亞等亞洲各國的養殖蝦業造成了嚴重的經濟損失。

我國水產養殖規模在不斷擴大，集約化養殖模式快速發展，水產養殖病害形勢變的非常嚴峻，AHPND和EHP是當前對蝦養殖主要病害，但目前尚缺少能夠快速有效的檢測方法。

發明內容

本發明提供了一種同時鑒定AHPND和EHP雙重熒光PCR方法，適用于養殖場監控、海關、水產技術推廣站等部門，對EHP和AHPND病原的檢測、分離和鑒定分析，用于解決對蝦養殖中EHP和AHPND流行、傳播、預防和控制的問題。

本發明首先提供了一種用于檢測對蝦急性肝胰腺壞死病和肝腸胞蟲的引物探針組合，其包含：

針對急性肝胰腺壞死病特征序列的第一引物組；

針對肝腸胞蟲特征序列的第二引物組；

所述急性肝胰腺壞死病特征序列為pirA^VP基因序列；

所述肝腸胞蟲特征序列為肝腸胞蟲的SWP1基因序列。

在根據本發明的一個實施方案中，所述pirA^VP基因序列為SEQ ID NO:7。

在根據本發明的一個實施方案中，所述SWP1基因序列為SEQ ID NO:8。

在根據本發明的一個實施方案中，所述第一引物組由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3組成。

在根據本發明的一個實施方案中，所述第二引物組由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6組成。

在根據本發明的一個實施方案中，由第一引物對和第二引物對組成，其中，

所述第一引物組由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3組成；

所述第二引物組由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6組成。