[發(fā)明專利]一種靶向調(diào)控抗原特異性T細胞的融合蛋白及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210819774.1
• 申請日: 2022-07-08
• 公開（公告）號: CN115838432A
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 潘利強;武越;陳樞青
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;A61K39/245;A61K39/00;A61P31/22;A61P35/00
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

1.一種靶向調(diào)控抗原特異性T細胞的融合蛋白，其特征在于，為異源二聚體，第一亞基包括依次連接的抗原肽-MHC分子復(fù)合物-Fc區(qū)域，第二亞基包括依次連接的蛋白片段-Fc區(qū)域，其中，第一亞基和第二亞基通過Fc區(qū)域形成異源二聚體；所述蛋白片段是具有激活或抑制T細胞功能的蛋白質(zhì)。

2.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述蛋白片段為CD80胞外區(qū)、PD-L1胞外區(qū)、抗共刺激受體的激動型單鏈抗體aCD28或細胞因子IL-2；抗原肽-MHC分子復(fù)合物加載的多肽為CMV PP65_495-503，序列為NLVPMVATV。

3.如權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，第一亞基中還包括β2微球蛋白和HLA-A*0201突變體，所述第一亞基的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.如權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，當?shù)鞍灼螢镃D80胞外區(qū)時，第二亞基的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

當?shù)鞍灼螢镻D-L1胞外區(qū)時，第二亞基的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；

當?shù)鞍灼螢榭构泊碳な荏w的激動型單鏈抗體aCD28時，第二亞基的氨基酸序列如SEQID No.4所示；

當?shù)鞍灼螢榧毎蜃覫L-2時，第二亞基的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。

5.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，第一亞基和第二亞基中Fc區(qū)域包含鉸鏈區(qū)、隨后的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，第一亞基和第二亞基的兩個CH3之間分別使用knob-into-hole技術(shù)設(shè)計成knob結(jié)構(gòu)和hole結(jié)構(gòu)。

6.編碼權(quán)利要求1～5任一所述融合蛋白的基因，第一亞基的編碼基因序列如SEQ IDNo.8所示；

當?shù)鞍灼螢镃D80胞外區(qū)時，第二亞基的編碼基因序列如SEQ ID No.9所示；

當?shù)鞍灼螢镻D-L1胞外區(qū)時，第二亞基的編碼基因序列如SEQ ID No.10所示；

當?shù)鞍灼螢榭构泊碳な荏w的激動型單鏈抗體aCD28時，第二亞基的編碼基因序列如SEQ ID No.11所示；

當?shù)鞍灼螢榧毎蜃覫L-2時，第二亞基的編碼基因序列如SEQ ID No.12所示。

7.如權(quán)利要求1～5任一項所述的融合蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)構(gòu)建表達第一亞基的編碼基因和第二亞基的編碼基因載體；

(2)將步驟(1)表達第一亞基的編碼基因和第二亞基的編碼基因載體轉(zhuǎn)染到哺乳動物細胞中，培養(yǎng)后進行蛋白純化，得到所述融合蛋白。

8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述載體為pcDNA3.1(+)；步驟(2)所述哺乳動物細胞為HEK293F細胞。

9.如權(quán)利要求1～5任一項所述的融合蛋白在制備抗病毒或抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求6所述的基因在制備抗病毒或抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。