[發(fā)明專利]新冠病毒全長(zhǎng)核衣殼蛋白DNA核酸適體的體外篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210814265.X
• 申請(qǐng)日: 2022-07-12
• 公開（公告）號(hào): CN115838728B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚蔚泓;宋明慧;方曉娜;羅昭峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與腫瘤研究所（籌）
• 主分類號(hào): C12N15/115
• 分類號(hào): C12N15/115;G01N33/569;A61P11/00;A61K47/54;A61P31/14
• 代理公司: 北京國(guó)翰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11696
• 代理人: 張?zhí)斐?/td>

1.一種用于篩選核酸適體的組合物，其特征在于，包括固相支持物以及與固相支持物結(jié)合的目標(biāo)分子或目標(biāo)分子的一部分，所述目標(biāo)分子為SARS-CoV-2核衣殼蛋白和/或DNA；所述固相支持物包括磁珠和/或瓊脂糖凝膠珠。

2.一種用于篩選核酸適體的反應(yīng)體系，其特征在于，所述反應(yīng)體系包括：

單鏈DNA文庫(kù)，所述單鏈DNA文庫(kù)包括至少一條能夠特異性識(shí)別所述目標(biāo)分子或目標(biāo)分子的一部分的核苷酸鏈；

引物，所述引物用于擴(kuò)增核酸適體文庫(kù)，序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示：

SEQ ID NO.6：CTTCTGCACGCCTCCTTCC；

SEQ ID NO.7：AGTGTCCGCCGATCTCGTCTCC；

權(quán)利要求1或2所述的組合物；

緩沖液。

3.一種篩選核酸適體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

合成引物和單鏈DNA文庫(kù)；

磁珠法篩選；其中包括配制權(quán)利要求2中所述的反應(yīng)體系、正篩和反篩、PCR擴(kuò)增。

4.一種核酸適體，其特征在于，包括序列如SEQ ID NO.1-5所示的核酸適體：

如SEQ ID NO.1所示的核酸適體N2-62：

CGCCTCCTTCCACGGGATCGGATTCCCCACTCGGCTCTATCGGATTGGAGACGAGATCGGCG；

如SEQ ID NO.2所示的核酸適體N10：

CGCCTCCTTCCTCTCGGGGTGTGTAGGGTCAGGGAGTGTGAGAGGAGGAGACGAGATCGGCG；

如SEQ ID NO.3所示的核酸適體N35：

CACGTCGGGGGGGTCACACATGAACCGTGCGGATACGGAGACGAG；

如SEQ ID NO.4所示的核酸適體N1-53：

CCGCCACGATCGGATTCGTCTCGGCTCTATCGGATTGGAGACGAGATCGGCGG;

如SEQ ID NO.5所示的核酸適體N2-56:

CGCCTACGGGATCGGATTCCCCACTCGGCTCTATCGGATTGGAGACGAGATCGGCG。

5.如權(quán)利要求4所述的核酸適體，其特征在于，所述核酸適體還包括由序列如SEQ IDNO.1-5所示的核酸適體通過(guò)修飾得到的核酸適體。

6.如權(quán)利要求5所述的核酸適體，其特征在于，所述修飾包括以下修飾方法的至少一種：

（1）磷酸化；

（2）甲基化；

（3）氨基化；

（4）巰基化；

（5）同位素化；

（6）用硫取代氧；

（7）用硒取代氧；

（8）偶聯(lián)生物素；

（9）偶聯(lián)化學(xué)發(fā)光基團(tuán)；

（10）偶聯(lián)化學(xué)熒光基團(tuán)；

（11）偶聯(lián)多肽；

（12）偶聯(lián)配體；

（13）偶聯(lián)siRNA；

（14）偶聯(lián)治療性基團(tuán)；

（15）偶聯(lián)乳膠微球。

7.一種用于檢測(cè)環(huán)境中新型冠狀病毒的試劑，其特征在于，包括：

FAM熒光染料標(biāo)記的，權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)中所述的核酸適體。

8.一種用于檢測(cè)環(huán)境中新型冠狀病毒的方法，其特征在于，包括：

對(duì)環(huán)境中待測(cè)區(qū)域進(jìn)行取樣；

將樣品與權(quán)利要求7所述試劑混合孵育；

混合孵育后測(cè)定混合物中的熒光強(qiáng)度，進(jìn)行結(jié)果判定。

9.一種檢測(cè)環(huán)境中SARS-CoV和/或SARS-CoV-2的方法，其特征在于，包括：

對(duì)環(huán)境中待測(cè)區(qū)域進(jìn)行取樣；

將樣品與權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)中所述的核酸適體進(jìn)行混合得到混合物；

檢測(cè)混合物中是否含有SARS-CoV-核酸適體復(fù)合物和/或SARS-CoV-2-核酸適體復(fù)合物。

10.權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)中所述方法篩選出的核酸適體的用途，包括以下至少一種：

特異性識(shí)別SARS-CoV-2；

特異性結(jié)合SARS-CoV-2；

制備用于檢測(cè)或鑒別SARS-CoV-2的試劑；

負(fù)載治療新型冠狀病毒肺炎的藥物；

靶向遞送治療新型冠狀病毒肺炎的藥物；

作為新型冠狀病毒的顯影劑或示蹤劑。