[發明專利]一種細胞凍存液及實施方法

在審

• 申請號: 202210810693.5
• 申請日: 2022-07-11
• 公開（公告）號: CN115053891A
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 余鴻楷;劉鴻基;曾筱恬;黃淑宇;符維萂;游慧;何香荔
• 申請（專利權）人: 廣州星望醫療科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京云科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11483
• 代理人: 張飆

1.一種細胞凍存液，配方包括：生理鹽水、甘油、葡萄糖和海藻糖，其特征在于：各組分的質量百分比含量分別是：85％的生理鹽水、10％的甘油、3％的葡萄糖和2％的海藻糖。

2.一種細胞凍存液的實施方法，包括步驟一，原料稱取；步驟二，制備凍存液；步驟三，滅菌處理；步驟四，細胞凍存；其特征在于：

其中上述步驟一中，以各組分的質量百分含量之和為1計，稱取85％的生理鹽水、10％的甘油、3％的葡萄糖和2％的海藻糖，備用；

其中上述步驟二中，將步驟一中所稱取的生理鹽水加入到燒杯中，并依次加入甘油、葡萄糖和海藻糖，攪拌混合后，得到凍存液；

其中上述步驟三中，取步驟二中所制備的凍存液，滅菌處理后備用；

其中上述步驟四中，對待凍存的細胞進行預處理，向其中添加適量的凍存液，調整細胞密度后分裝入凍存管中，每管1-1.5ml，梯度降溫至-70℃，并保溫放置12-24h，最后移入液氮容器內保存即可。

3.根據權利要求2所述的一種細胞凍存液的實施方法，其特征在于：所述步驟二中，采用磁力攪拌機進行攪拌，攪拌時間為30min。

4.根據權利要求2所述的一種細胞凍存液的實施方法，其特征在于：所述步驟三中，采用紫外線進行滅菌處理，紫外線燈照射時間為10-20min。

5.根據權利要求2所述的一種細胞凍存液的實施方法，其特征在于：所述步驟四中，細胞預處理具體為：首先去除舊培養液，并使用PBS清洗細胞；然后去除PBS，加入適量胰蛋白酶消化單層生長的細胞，離心處理后，去除胰蛋白酶，備用。

6.根據權利要求2所述的一種細胞凍存液的實施方法，其特征在于：所述步驟四中，調整細胞密度為5×10⁶-5×10⁷個/ml。

7.根據權利要求2所述的一種細胞凍存液的實施方法，其特征在于：所述步驟四中，梯度降溫的降溫速率為5-10℃/min。