[發明專利]一種功能化固相微萃取探針及其在河鲀魚毒素活體檢測中的應用

在審

• 申請號: 202210809169.6
• 申請日: 2022-07-11
• 公開（公告）號: CN115337670A
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 劉源;孟恒立;姜水;胡云
• 申請（專利權）人: 上海交通大學;揚州市食品藥品檢驗檢測中心
• 主分類號: B01D15/10
• 分類號: B01D15/10;B01D15/26;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 周一新

本發明公開了一種功能化固相微萃取探針及其在河鲀魚毒素活體檢測中的應用，該探針由氧化石墨烯?聚丙烯腈溶液涂覆于活化不銹鋼針上并在表面自發聚合PNE涂層得到，活化不銹鋼針一端垂直浸入氧化石墨烯?聚丙烯腈溶液，緩慢取出，加熱使涂層固定，重復浸入和加熱步驟使涂層均勻包裹在活化不銹鋼針上，浸入去甲腎上腺素溶液中在其表面自發聚合形成涂層。本發明的功能化固相微萃取探針可以檢測出活體河鲀魚中的河鲀魚毒素含量，檢出限滿足河鲀魚安全食用需要，檢測不需要殺死河鲀魚，可在1小時內完成萃取和檢測過程，靈敏度高且檢測成本低，同時有效避免檢測河鲀魚毒素導致的樣品致死性問題。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體涉及一種功能化固相微萃取探針及其在河鲀魚毒素活體檢測中的應用。

背景技術

我國河鲀魚食用歷史悠久，是河鲀魚的產銷大國，擁有豐富的河鲀魚資源。然而，河鲀魚在生長過程中容易受到環境中各類污染物的侵襲從而在體內積聚河鲀魚毒素，對河鲀魚的食用安全產生嚴重威脅。而且，河鲀魚毒素有較高的穩定性，一般的烹飪方法很難將其破壞，且中毒后尚無針對性的解毒劑或抗毒素。因此，用科學有效的方法檢測河鲀魚中的河鲀魚毒素，從而避免河鲀魚毒素中毒事件的發生非常重要。現有的河鲀魚毒素檢測方法包括小鼠生物法、免疫檢測法、儀器分析法等，仍存在一些不足之處。例如，中國發明專利申請(公布號：CN201410603308.5)公開“免疫親和柱凈化-液相色譜-串聯質譜測定海洋生物中河豚毒素的方法”，利用免疫親和柱的獨特選擇識別性和液相色譜-串聯質譜的高靈敏性和精確性，測定海洋生物中的河鲀魚毒素，但不足之處在于：在前處理過程中需要使用溶劑提取河鲀魚毒素，并用免疫親和柱進行凈化，步驟繁瑣且免疫親和柱也需要經過十天以上才能制備完成，比較耗時，而且檢測過程對樣品具有致死性。中國發明專利申請(公布號：CN201410251894.1)公開“一種河豚毒素檢測試劑盒”，利用免疫增強乳膠比濁法快速簡便地檢測河鲀魚毒素，實現大批量檢測，但不足之處在于：需要將樣品解刨均質后測定，破壞了河鲀魚較高的經濟價值，并且與河鲀魚毒素單克隆抗體相結合的納米乳膠顆粒制備過程也較繁瑣。因此，尋找一種河鲀魚毒素快速簡便的活體檢測方法很有必要。

固相微萃取(SPME)技術是一種相對新型的無溶劑萃取方法，集采集、分離和富集于一體，是一種方便快捷與綠色環保的樣品前處理技術。SPME對整個樣品體系的影響較小，可以用于檢測或分析活體動物中的目標組分。例如，中國發明專利申請(公布號：CN112547030A) 公開“一種超交聯聚合物納米顆粒固相微萃取生物相容性探針及其在活體分析中的應用”，含有超交聯聚合物納米顆粒和聚去甲腎上腺素生物相容涂層的石英纖維作為固相微萃取探針用于植物活體中農藥殘留分析，同樣探針的制備過程比較繁瑣。基于SPME技術在活體檢測中的優勢，急需構建一種河鲀魚毒素的活體檢測方法探究河鲀魚毒素在魚體內的殘留水平，且現有技術中尚未有基于固相微萃取技術活體檢測河鲀魚毒素的相關報道。

發明內容

針對現有技術中檢測河鲀魚毒素存在準備時間長、檢測成本高和樣品致死性方面的不足，本發明主要目的在于提供一種功能化固相微萃取探針，靈敏度高且成本低。

本發明另一目的在于提供上述功能化固相微萃取探針的制備方法，通過浸漬法制備得到。

本發明再一目的在于提供上述功能化固相微萃取探針在河鲀魚毒素活體檢測中的應用，準備時間短、靈敏度高且檢測成本低，有效避免檢測河鲀魚毒素導致的樣品致死性問題。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

第一方面，本發明提供一種功能化固相微萃取探針，其通過氧化石墨烯-聚丙烯腈溶液涂覆于活化不銹鋼針上并由去甲腎上腺素溶液在其表面自發聚合形成PNE涂層得到，其中：