[發明專利]一種檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物及其應用

在審

• 申請號: 202210798933.4
• 申請日: 2022-07-06
• 公開（公告）號: CN115992266A
• 公開（公告）日: 2023-04-21
• 發明（設計）人: 張棟;趙磊;王世杰;劉洋;袁慶彬;張奕南;馮麗莉;孟冬青;薛玉玲;趙渝;荀一萍;寧一冰
• 申請（專利權）人: 君樂寶乳業集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/225
• 代理公司: 石家莊科誠專利事務所(普通合伙) 13113
• 代理人: 張紅衛;李琳

本發明公開了一種檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物及其應用，所述引物組合物包括引物對和探針；本發明還公開了上述引物組合物的應用，應用于鼠李糖乳桿菌X253的定性和/或定量檢測。本發明提供的檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物，具有良好的特異性、重復性和靈敏性；應用含有該引物組合物對樣品中鼠李糖乳桿菌X253進行菌株定性定量測定時更加快速、準確，可有效提高對含有鼠李糖乳桿菌X253的食品原料、中間體及成品質量安全監控的力度和效率。本發明適用于對食品中鼠李糖乳桿菌X253定性定量分析。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，涉及一種檢測益生菌的引物組合物，具體地說是一種檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物及其應用。

背景技術

鼠李糖乳桿菌(Lacticasei-bacillus?rhamnosus)屬于革蘭氏陽性菌，兼性厭氧，異型發酵乳酸菌，廣泛分布于動物胃腸道、生殖道、乳制品及植物材料中。如今，鼠李糖乳桿菌被廣泛應用于乳制品、保健食品、動物飼料及生物醫藥等領域，體現了其較高的經濟價值。鼠李糖乳桿菌中的鼠李糖乳桿菌X253分離篩選自新疆發酵乳，研究表明，該菌是安全性強、對人體胃腸液有較強的耐受性，同時該菌抗氧化能力強、有益口腔健康、可緩解體力疲勞，是一種具良好市場前景的潛在菌株。但當鼠李糖乳桿菌X253在食品中過量增殖時，也會影響人體的免疫機能以及腸道的菌落平衡；鼠李糖乳桿菌X253數量過低時，達不到預期的有益效果。因此，針對鼠李糖乳桿菌X253的檢驗也是在食品相關原料、食品的生產和質量安全中重要環節。

目前益生菌的鑒定主要分為培養法和分子生物學法。培養法主要是通過形態學、革蘭氏染色和生化測試進行鑒定，非常耗時且無法對同種內菌株進行區分。分子生物學方法主要包括16S?rDNA、16S-23S?ITS基因序列測序方法、脈沖場凝膠電泳法、隨機擴增多態性DNA分析或擴增長度多態性分析等，存在以下不足：(1)在辨別密切相關的物種和亞種方面存在局限性；(2)操作復雜、重復性差、需要專業技能或先進的硬件和軟件。因此，開發一種適用于企業的簡便、快速、重復性好的鼠李糖乳桿菌X253菌株水平鑒定及量化方法勢在必行。

發明內容

本發明一個目的，旨在提供一種檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物，以達到定性定量地檢測樣品中的鼠李糖乳桿菌X253的目的；

本發明的另一個目的，旨在提供上述引物組合物的應用。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物，所述引物組合物包括引物對和探針；所述引物對，上游引物的核苷酸序列為：ggttggtcgtttgccttatca；下游引物的核苷酸序列為：ttcagtatccaccagcccacta；所述探針的核苷酸序列為：actggcccatgctt。

本發明還提供了所述檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物一種應用，所述引物組合物在定性和/或定量檢測鼠李糖乳桿菌X253中的應用。

作為對上述檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物應用的一種限定，所述定性檢測鼠李糖乳桿菌X253的方法為：收集樣品菌體、提取樣品DNA、qPCR擴增、分析、判定；

所述判定的標準包括，qPCR擴增產物起峰且Cq值35，則樣品中鼠李糖乳桿菌X253檢測結果為陽性。

作為對上述檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物應用的另一種限定，根據權利要求2所述檢測鼠李糖乳桿菌X253的引物組合物的應用，其特征在于，所述定量檢測鼠李糖乳桿菌X253的方法包括依次進行的以下步驟：

S1.標準曲線的制作

取鼠李糖桿菌X253菌液標準品，梯度稀釋，提取菌液標準品DNA作為模板進行qPCR擴增，線性擬合，建立標準曲線；

S2.樣品中鼠李糖乳桿菌X253的定量測定