[發(fā)明專(zhuān)利]新型人精子冷凍保護(hù)劑制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210783054.4 | 申請(qǐng)日： | 2022-07-05 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN115024309A | 公開(kāi)（公告）日： | 2022-09-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 傅龍龍;盧文紅;周芳;谷翊群 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 國(guó)家衛(wèi)生健康委科學(xué)技術(shù)研究所 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | A01N1/02 | 分類(lèi)號(hào)： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京世譽(yù)鑫誠(chéng)專(zhuān)利代理有限公司 11368 | 代理人： | 郭官厚 |
| 地址： | 100081 *** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 新型 人精 冷凍 保護(hù) 制備 方法 | ||
本發(fā)明公開(kāi)了新型人精子冷凍保護(hù)劑制備方法，包括以下步驟：S1制備GEYC冷凍保護(hù)劑；S2向GEYC冷凍保護(hù)劑中加入7水硫酸鋅，得到該新型人精子冷凍保護(hù)劑，本發(fā)明適用于精子冷凍復(fù)蘇技術(shù)領(lǐng)域，以硫酸鋅為材料添加入現(xiàn)有人精子冷凍保護(hù)添加劑(甘油?卵黃?林檬酸鹽冷凍保護(hù)添加劑，GEYC)，得到新型人精子冷凍保護(hù)劑(Zn?GEYC)。與常規(guī)的GEYC相比的，Zn?GEYC可能改善抗精子線粒體結(jié)構(gòu)和功能，提升精子糖代謝能力，改善精子冷凍損傷，提高冷凍復(fù)蘇后精子活力，增高冷凍復(fù)蘇后精子活動(dòng)的平均經(jīng)線速率，增加現(xiàn)有人精子冷凍復(fù)蘇率。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于精子冷凍復(fù)蘇技術(shù)領(lǐng)域，具體是新型人精子冷凍保護(hù)劑制備方法。
背景技術(shù)
精子冷凍復(fù)蘇方法為：
根據(jù)WHO《人類(lèi)精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》第5版的推薦方法，采用GEYC為冷凍保護(hù)液，使用程控冷凍儀進(jìn)行慢速降溫和冷凍：冷凍保護(hù)劑以1:1的量加入精液中，30-35℃孵育5min，從20℃到-6℃，降溫1.5℃/min；然后6℃/min至-100℃；持續(xù)30min，轉(zhuǎn)移入液氮中。液氮中冷凍2周后，37℃水浴中快速?gòu)?fù)溫。
然而，精子冷凍復(fù)蘇過(guò)程受多種因素影響：滲透壓改變、冷凍休克損傷、細(xì)胞內(nèi)外冰晶形成、冷凍保護(hù)劑毒性等，均會(huì)引起精子質(zhì)量下降：降低總活動(dòng)精子百分?jǐn)?shù)、運(yùn)動(dòng)參數(shù)也下降明顯，因此，提高冷凍復(fù)蘇后精子活力，改善患者精子冷凍復(fù)蘇率，仍是目前生殖領(lǐng)域的重要臨床需求。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供新型人精子冷凍保護(hù)劑制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：
新型人精子冷凍保護(hù)劑制備方法，包括以下步驟：
S1制備GEYC冷凍保護(hù)劑；
S2向GEYC冷凍保護(hù)劑中加入7水硫酸鋅，得到該新型人精子冷凍保護(hù)劑。
優(yōu)選的，所述步驟S1中，制備GEYC冷凍保護(hù)劑，包括以下步驟：
S11在枸櫞酸二水中加適量無(wú)菌蒸餾水，得到3％枸櫞酸鈉；
S12量取39mL3％枸櫞酸鈉放入反應(yīng)容器中，加入1.5g氨基乙酸，加入39mL5％葡萄糖注射液和15ml甘油，充分混勻、溶解、過(guò)濾后，加入20ml新鮮卵黃，得到保護(hù)劑粗品；
S13將保護(hù)劑粗水浴攪拌，控制pH值在7.2～7.4范圍內(nèi)，細(xì)菌檢測(cè)和精子毒性檢測(cè)均合格后，得到該新型人精子冷凍保護(hù)劑，分裝保存。
優(yōu)選的，所述步驟S11中，稱(chēng)量3.418g枸櫞酸二水，加無(wú)菌蒸餾水至100mL，得到3％枸櫞酸鈉。
優(yōu)選的，所述步驟S12中，過(guò)濾設(shè)備為0.22μm微孔濾器。
優(yōu)選的，所述步驟S12中，新鮮卵黃提取方法為：選用SPF級(jí)雞蛋3個(gè)～5個(gè)，清洗雞蛋后，用75％酒精消毒蛋殼，保持卵黃完整的前提下，留取卵黃，去除蛋清，選用10mL滅菌注射器刺破卵黃膜，吸取卵黃。
優(yōu)選的，所述步驟S13中，水浴溫度為56℃，時(shí)間為40min。
優(yōu)選的，所述步驟S13中，分裝包括：
在超凈臺(tái)內(nèi)，將新型人精子冷凍保護(hù)劑以2mL/管分裝于玻璃瓶?jī)?nèi)。
優(yōu)選的，所述步驟S13中，保存溫度為-70℃，避免反復(fù)凍融，且使用時(shí)間不超過(guò)3個(gè)月。
優(yōu)選的，所述步驟S13中，所述7水硫酸鋅加入量為1.435*10-7g。
綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：
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