[發明專利]一種檢測雞傳染性支氣管炎病毒及基因分型的RT-RAA引物探針組、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202210778469.2
• 申請日: 2022-06-30
• 公開（公告）號: CN115323075B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 謝青梅;張新珩;巫秀紅;封柯宇;邵冠明
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 吳波

本發明提供了一種檢測雞傳染性支氣管炎病毒及基因分型的RT?RAA引物探針組、試劑盒及其應用，屬于分子生物學技術領域。本發明提供的RT?RAA引物探針組，包括Vi引物探針組和By引物探針組中的至少一組；其中Vi引物探針組中Vi引物的正、反引物、Vi探針的核苷酸序列分別如SEQIDNO.1?3所示；By引物探針組中By引物的正、反引物、By探針的核苷酸序列分別如SEQIDNO.4?6所示。本發明提供的Vi引物對能夠特異性檢測CHⅠ型?CHⅤ型或Mass型的雞傳染性支氣管炎病毒，By引物對能夠特異性檢測CHⅥ型雞傳染性支氣管炎病毒，具有檢測時間短、特異性強的優勢。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，尤其涉及一種檢測雞傳染性支氣管炎病毒及基因分型的RT-RAA引物探針組、試劑盒及其應用。

背景技術

雞傳染性支氣管炎(Infectious?Bronchitis，IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious?Bronchitis?Virus，IBV)引起的一種急性、高度接觸性呼吸道傳染病。IBV是禽類冠狀病毒Y-冠狀病毒屬(Ganmmacoronavirus)的一員，感染后以呼吸道癥狀、腎炎和生產性能下降為特征。S1蛋白是IBV主要的免疫原蛋白，能介導細胞融合，刺激機體產生病毒中和抗體和血凝抑制抗體；S1蛋白基因具有較強的型特異性，但很容易發生變異，使IBV不斷的出現新的血清型。疫苗是我國預防控制IBV的主要手段，但IBV基因組極易發生變異，導致基因型、血清型、致病性和免疫原性多樣化，在面對不同基因型或血清型的毒株之間，疫苗的交叉保護效果不理想。

目前，針對不同基因型的IBV檢測主要是運用PCR方法檢測后送到生物公司進行測序，在對測序結果進行分析，得出結論，這一過程需要2-3天的時間。對于爭分奪秒的IBV疫情防控措施下，該方法耗時太長。目前IBV分離株S1基因包括7個基因型：CHⅠ型-CHⅥ型和Mass型，如何快速確定S1基因分型，進而快速區分IBV的流行趨勢，能夠為疫苗等生物制品的發展，疫情防控措施提供快速的診斷手段。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種不僅能夠檢測雞傳染性支氣管炎病毒而且還能夠對該病毒基因進行分型的RAA引物探針組，采用本發明引物探針組進行雞傳染性支氣管炎病毒的檢測及基因的分型，具有檢測方法簡單、靈敏度高、不需要昂貴儀器設備、檢測時間短、適于大規模推廣應用的優勢。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種檢測雞傳染性支氣管炎病毒的RT-RAA引物探針組，包括Vi引物探針組和By引物探針組中的至少一組；所述Vi引物探針組中Vi引物的正反引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1-2所示，Vi探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；所述By引物探針組中By引物的正反引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4-5所示，By探針的核苷酸序列如SEQ?IDNO.6所示。

本發明還提供了一種上述引物探針組在制備檢測雞傳染性支氣管炎病毒產品中的應用。

本發明還提供了一種上述引物探針組在制備雞傳染性支氣管炎病毒基因分型產品中的應用。

本發明還提供了一種非診斷目的的檢測雞傳染性支氣管炎病毒的方法，包括以下步驟：提取待測樣本的RNA，以待測樣本的RNA為模板，用權利要求1所述引物探針組進行RT-RAA反應，若有熒光擴增曲線出現，出峰時間≤20min或Ct值≤30，則待測樣本為雞傳染性支氣管炎病毒陽性，若無熒光擴增曲線出現，出峰時間＞20min或Ct值＞39，則待測樣本為雞傳染性支氣管炎病毒陰性。

優選的，當采用上述Vi引物探針組進行RT-RAA反應時，若結果為陽性，則待測樣本為CHⅠ型-CHⅤ型或Mass型雞傳染性支氣管炎病毒；當采用上述By引物探針組進行RT-RAA反應時，若結果為陽性，則待測樣本為CHⅥ型雞傳染性支氣管炎病毒。