[發明專利]內含肽Mtu RecA突變體及其在生產谷胱甘肽GSH中的應用

有效

• 申請號: 202210778265.9
• 申請日: 2022-06-30
• 公開（公告）號: CN115093470B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 羅元廷;張志乾;王嘉鵬;王海梅;吳奕瑞;劉麗花;江翱;胡玉成
• 申請（專利權）人: 廣州市乾相生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/35
• 分類號: C07K14/35;C12N15/35;C07K19/00;C12N15/70;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 蘇州根號專利代理事務所(普通合伙) 32276
• 代理人: 項麗

本發明涉及一種內含肽Mtu RecA突變體，來源于Mycobacterium tuberculosis的RecA蛋白，其序列如SEQ ID No.3所示，編碼DNA如SEQ ID No.4所示，并利用此內含肽構建了pET28a?內含肽Mtu RecA突變體?谷胱甘肽GSH及其原核表達載體。還公開了利用此內含肽生產谷胱甘肽GSH的方法。本發明公開了一種內含肽Mtu RecA突變體，并用該內含肽與谷胱甘肽GSH進行融合表達，這種表達方式具有表達量高、純化簡單的優點，可以大幅降低谷胱甘肽GSH的生產成本。與傳統內含肽Mtu RecA相比，本發明的內含肽Mtu RecA突變體能明顯提高谷胱甘肽GSH的產量和純度。

技術領域

本發明屬于蛋白質工程技術領域，特別涉及一種內含肽Mtu RecA突變體，可應用于谷胱甘肽GSH的生產。

背景技術

谷胱甘肽(glutathione，r-glutamyl cysteingl glycine，GSH)是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成。半胱氨酸上的巰基為其活性基團，易與某些藥物、毒素等結合，使其具有整合解毒作用。谷胱甘肽不僅可用于藥物，更可作為功能性食品的基料，在延緩衰老、增強免疫力、抗腫瘤等功能性食品中廣泛應用，谷胱甘肽能清除體內自由基，具有抗氧化的功能，除此之外還能幫助保持正常的免疫系統的功能。因此谷胱甘肽GSH具有重要的市場應用價值。但是，目前關于谷胱甘肽的工業化合成主要依賴于化學合成，這種合成方法副產物多、產率低、污染大、成本高，難以符合“碳中和”的時代需求。生物合成可以有效解決化學合成的缺陷，具有產率高、成本低和節能環保等優點。但對于復雜結構的谷胱甘肽GSH，仍然沒有高效的合成途徑。

發明內容

本發明的目的在于提供一種內含肽Mtu RecA突變體，并將其應用于谷胱甘肽GSH的表達分離純化。

為了達到上述目的，所采取的技術解決方案如下：

一種內含肽Mtu RecA突變體，來源于Mycobacterium tuberculosis的RecA蛋白(Sequence ID:CFE66777.1)，截取93-186和488-531兩段氨基酸序列，組合成融合蛋白，并將第一位半胱氨酸替換成丙氨酸，在C末端加上一個天冬酰胺，突變后的內含肽Mtu RecA突變體具體氨基酸序列見SEQ ID No.3，編碼DNA序列可以是序列表中SEQ ID No.4所示的序列，或者編碼序列表中SEQ ID No.3蛋白質序列的多核苷酸序列。

本發明還公開了上述的內含肽Mtu RecA突變體在生產谷胱甘肽GSH中的應用。

本發明還公開了一種內含肽Mtu RecA突變體-谷胱甘肽GSH融合蛋白，其序列如SEQ ID No.7所示。

上述的內含肽Mtu RecA突變體-谷胱甘肽GSH融合蛋白的編碼DNA，其序列可以是序列表中SEQ ID No.8所示的序列，或者為編碼序列表中SEQ ID No.7蛋白質序列的多核苷酸序列。

本發明還公開了一種pET28a-內含肽Mtu RecA突變體-谷胱甘肽GSH表達質粒，表達上述的內含肽Mtu RecA突變體-谷胱甘肽GSH融合蛋白。

上述的內含肽Mtu RecA突變體-谷胱甘肽GSH融合蛋白的原核表達載體。

優選的，所述原核表達載體為將上述的pET28a-內含肽Mtu RecA突變體-谷胱甘肽GSH表達質粒轉化到大腸桿菌宿主菌而成。

本發明還公開了一種谷胱甘肽GSH的生產方法，其特征在于其步驟包括：

(1)構建pET28a-內含肽Mtu RecA突變體-谷胱甘肽GSH表達質粒；

(2)將pET28a-內含肽Mtu RecA突變體-谷胱甘肽GSH表達質粒轉化到大腸桿菌宿主菌，選出陽性克隆；