[發(fā)明專利]一種反芻專用液態(tài)復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210778243.2 | 申請日： | 2022-06-30 |
| 公開（公告）號： | CN114908026A | 公開（公告）日： | 2022-08-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王希國 | 申請（專利權(quán)）人： | 哈爾濱韶創(chuàng)生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/18;A23K10/18;A23K50/10;C12R1/865;C12R1/25;C12R1/23;C12R1/125;C12R1/01 |
| 代理公司： | 沈陽天贏專利代理有限公司 21251 | 代理人： | 孫萬玲 |
| 地址： | 150000 黑龍江省哈爾濱市香*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 反芻 專用 液態(tài) 復(fù)合 生態(tài) 制劑 及其 制備 方法 | ||
1.一種反芻專用液態(tài)復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于，包括以下重量百分比的原料：屎腸球菌20％、植物乳桿菌15％、嗜酸乳桿菌15％、枯草芽孢桿菌20％、普利菌-7 15％和釀酒酵母15％。
2.一種反芻專用液態(tài)復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)準備好制備需要的工具和機械等，再按一定比例稱取原料備用；
2)在150ML-250ML的發(fā)酵罐中裝入50ML-100ML的微生物液體培養(yǎng)基備用；
3)按照一定百分比的接種量在發(fā)酵罐中的微生物液體培養(yǎng)基中接入屎腸球菌，植物乳桿菌，嗜酸乳桿菌，枯草芽孢桿菌，普利菌-7和釀酒酵母，再分別放于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一定時間得到一級菌劑；
4)將每個材料制得的一級菌劑按無菌操作分別接入一定量的無菌改良MRS培養(yǎng)基中，并按一定的接種量，在恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)一定時間，可得到活菌數(shù)為一定量的二級菌劑；
5)將每個材料制得的二級菌劑按無菌操作分別接入一定量的無菌改良MRS培養(yǎng)基中，并按一定的接種量，在恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)一定時間，即可得到活菌數(shù)為一定量的液態(tài)高密度培養(yǎng)液；
6)分別將將屎腸球菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和普利菌-7的液態(tài)高密度培養(yǎng)液以4︰3︰3︰4︰3︰3比例進行配比，再真空包裝即可得到最終菌劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種反芻專用液態(tài)復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于：所述屎腸球菌菌劑的制備方法如下：
①所述屎腸球菌外購，經(jīng)篩選純化獲得優(yōu)良純種菌株；
②一級菌劑——將活化斜面菌種接種于裝有50ML無菌改良MRS培養(yǎng)基的錐形瓶中，錐形瓶容積為150ML，放于37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)速為50rpm；
③二級菌劑——將一級菌液按無菌操作接入5L無菌改良MRS培養(yǎng)基中，接種量為3％，37℃恒溫好氧培養(yǎng)16h，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm，活菌數(shù)為≧1×1010CFU/ML；
④發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)——將二級菌液按無菌操作接入200L無菌改良MRS培養(yǎng)基中，接種量為3％，37℃恒溫培養(yǎng)16h，轉(zhuǎn)速為100rpm，活菌數(shù)為≧1×1010CFU/ML；
⑤所述屎腸球菌液態(tài)培養(yǎng)的改良MRS培養(yǎng)基為：葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母浸粉0.5％，乙酸鈉0.5％，磷酸氫二鉀0.2％，檸檬酸氫二銨2％，硫酸鎂0.058％，硫酸錳0.025％，碳酸鈣1％，吐溫80 0.1％，pH值7.0±0.2。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種反芻專用液態(tài)復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于：所述植物乳桿菌菌劑的制備方法如下：
①所述植物乳桿菌外購，經(jīng)篩選純化獲得優(yōu)良純種菌株；
②一級菌劑——將活化斜面菌種接種于裝有50ML無菌改良MRS培養(yǎng)基的錐形瓶中，錐形瓶容積為250ML，放于37℃恒溫靜止培養(yǎng)24h；
③二級菌劑——將一級菌液按無菌操作接入200ML無菌改良MRS培養(yǎng)基中，接種量為2％，37℃恒溫靜止培養(yǎng)18h，活菌數(shù)為≧1×109CFU/ML；
④發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)——將二級菌液按無菌操作接入200L無菌改良MRS培養(yǎng)基中，接種量為3％，37℃恒溫靜止24h，活菌數(shù)為≧1×109CFU/ML；
⑤所述植物乳桿菌液態(tài)培養(yǎng)的優(yōu)化MRS培養(yǎng)基為：葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母浸粉0.5％，乙酸鈉0.5％，磷酸氫二鉀0.2％，檸檬酸氫二銨2％，硫酸鎂0.058％，硫酸錳0.025％，吐溫80 0.1％，pH值7.0±0.2。
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