[發(fā)明專利]豬肌內(nèi)脂肪含量性狀相關(guān)的ADIG基因單倍型變異遺傳標(biāo)記及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210778180.0
• 申請(qǐng)日: 2022-06-29
• 公開（公告）號(hào): CN115323061A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳俊靜;劉曉哲;梅書棋;彭先文;喬木;周佳偉;徐忠;張宇;李梓芃;孫華;宋忠旭;趙海忠;李良華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 萬青青

本發(fā)明公開一種豬肌內(nèi)脂肪含量性狀相關(guān)的ADIG基因單倍型變異遺傳標(biāo)記，利用現(xiàn)有的PCR和測(cè)序技術(shù)，在ADIG基因第四外顯子上251bp處存在一個(gè)GA堿基突變(即等位基因突變)，在426bp處存在一個(gè)GA堿基突變(即等位基因突變)，兩個(gè)突變緊密連鎖，且發(fā)現(xiàn)此多態(tài)位點(diǎn)與豬肌內(nèi)脂肪含量性狀顯著相關(guān)，為豬肌內(nèi)脂肪含量性狀的遺傳標(biāo)記輔助育種提供了一個(gè)新的單倍型遺傳標(biāo)記，對(duì)豬生長性狀和肉質(zhì)性狀的研究有一定幫助。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于家畜遺傳標(biāo)記篩選技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豬ADIG基因第四外顯子變異作為肌內(nèi)脂肪含量性狀的遺傳標(biāo)記及應(yīng)用。

背景技術(shù)

豬肉消費(fèi)長期占我國肉類消費(fèi)的60％左右，是城鄉(xiāng)居民不可或缺的“肉盤子”產(chǎn)品。當(dāng)前，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，豬肉消費(fèi)已由滿足量的需求逐步轉(zhuǎn)為量與質(zhì)并舉的多元化、優(yōu)質(zhì)化轉(zhuǎn)變。因此，豬肉品質(zhì)遺傳改良已越來越被重視。肌內(nèi)脂肪含量(Intramuscular Fat,IMF) 是影響肉品質(zhì)性狀的一項(xiàng)重要指標(biāo)，它與豬肉的嫩度、風(fēng)味、多汁性存在顯著相關(guān)(Lu et al.2008)。然而，豬肉質(zhì)性狀較難活體測(cè)量，很難用常規(guī)育種技術(shù)進(jìn)行遺傳改良，因此尋找控制豬肉質(zhì)性狀(尤其是IMF)的關(guān)鍵分子遺傳標(biāo)記，應(yīng)用于該性狀的分子輔助育種，對(duì)提高豬肉品質(zhì)性能具有重要意義。

脂肪生成素(Adipogenin,ADIG)是一種在脂肪組織中分泌的核蛋白因子，其在調(diào)控脂肪生理功能方面起著重要作用。它僅在脂肪細(xì)胞中表達(dá)，而不在基質(zhì)血管細(xì)胞群中表達(dá)(Kim et al.,2005)。Liu等(2017)通過對(duì)牛肌衛(wèi)星細(xì)胞的誘導(dǎo)分化發(fā)現(xiàn)，ADIG基因過表達(dá)可以促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞轉(zhuǎn)分化并增加其脂肪的積累。Zhang等(2021)在對(duì)云嶺牛背最長肌的轉(zhuǎn)錄組分析中也發(fā)現(xiàn)，ADIG基因在脂肪細(xì)胞質(zhì)膜中特異性表達(dá)，可以調(diào)節(jié)脂肪組織的分化與增殖。ADIG基因在體外的過表達(dá)會(huì)促進(jìn)脂肪堆積，相反，敲減ADIG 基因則會(huì)抑制脂肪生成。然而，還未見有關(guān)豬ADIG基因?qū)χ炯?xì)胞的影響報(bào)道。

申請(qǐng)人前期利用RNA-seq技術(shù)對(duì)比分析了豬高低IMF極端個(gè)體背最長肌組織基因表達(dá)差異情況，發(fā)現(xiàn)ADIG基因在高低IMF個(gè)體背肌組織中顯著差異表達(dá)。因此，申請(qǐng)人擴(kuò)增了豬ADIG基因的部分核苷酸序列，利用該序列進(jìn)行了遺傳變異位點(diǎn)的篩選鑒定及與IMF性狀的關(guān)聯(lián)分析研究，以期獲得與豬IMF性狀相關(guān)的新分子育種標(biāo)記。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于擴(kuò)增豬ADIG基因的部分核苷酸序列，以尋找該序列突變位點(diǎn)多態(tài)性，獲得一種與豬肌內(nèi)脂肪含量性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記，并利用該遺傳標(biāo)記輔助選擇目標(biāo)性狀的豬，提高育種效率。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

第一方面，本發(fā)明獲得了一種豬肌內(nèi)脂肪含量性狀相關(guān)基因ADIG的單倍型遺傳標(biāo)記，它是含豬ADIG基因第四外顯子的DNA片段，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1(長度為685bp)和SEQ ID NO：2(長度為 685bp)所示。在SEQ ID NO：1和第SEQ ID NO：2第251堿基處存在一個(gè)GA堿基突變(如圖3所示)，在該序列第426堿基處存在一個(gè)GA堿基突變(如圖4所示)。

第二方面，本發(fā)明還提供了一種用于獲得上述遺傳標(biāo)記的引物對(duì)，該引物對(duì)為：

正向引物：5’-CCCCTTTCATCTCACAAC-3’(SEQ ID NO：3)

負(fù)向引物：5’-ACAATCTACCCAGGCTCT-3’(SEQ ID NO：4)。

第三方面，本發(fā)明還提供了一種上述遺傳標(biāo)記的獲得方法，以硒都黑豬基因組DNA混合池為模板，采用以下引物對(duì)：

正向引物：5’-CCCCTTTCATCTCACAAC-3’(SEQ ID NO：3)

負(fù)向引物：5’-ACAATCTACCCAGGCTCT-3’(SEQ ID NO：4)