[發(fā)明專利]降解土壤中復(fù)合多環(huán)芳烴的固載型粗酶及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210776864.7
• 申請(qǐng)日: 2022-07-03
• 公開（公告）號(hào): CN115011587B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高大文;趙歡;梁紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京建筑大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/14
• 分類號(hào): C12N11/14;C12N1/14;C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23210
• 代理人: 何強(qiáng)

降解土壤中復(fù)合多環(huán)芳烴的固載型粗酶及其制備方法，它涉及復(fù)合有機(jī)污染土壤領(lǐng)域，特別涉及一種固載型粗酶及其制備方法。本發(fā)明降解土壤中復(fù)合多環(huán)芳烴的固載型粗酶由酸改性的板栗內(nèi)殼和白腐真菌的粗酶液制成；白腐真菌的粗酶液中包括銅離子溶液。制備方法：一、板栗內(nèi)殼制成粉末材料；二、制改性生物炭；三、固載。本發(fā)明降解土壤中復(fù)合多環(huán)芳烴的固載型粗酶利用酸改性的板栗內(nèi)殼作為固態(tài)負(fù)載體，改性的板栗內(nèi)殼具有清晰的孔洞結(jié)構(gòu)有利于白腐真菌粗酶液的負(fù)載、固定和保護(hù)，大大提升了白腐真菌粗酶在實(shí)際土壤修復(fù)環(huán)境中對(duì)多環(huán)芳烴的降解效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及復(fù)合有機(jī)污染土壤領(lǐng)域，特別涉及一種固載型粗酶及其制備方法。

背景技術(shù)

2014年發(fā)布的《全國土壤污染狀況調(diào)查公報(bào)》顯示我國土壤環(huán)境狀況總體不容樂觀，城市土壤作為城市建設(shè)的自然基礎(chǔ)，對(duì)于人類社會(huì)的生存發(fā)展至關(guān)重要。然而，隨著石油、煤炭等化工企業(yè)搬離城市，以多環(huán)芳烴為主要污染物的遺留地土壤污染愈演愈烈，引起了一系列城市生態(tài)環(huán)境問題。

與利用細(xì)菌和真菌等微生物對(duì)多環(huán)芳烴的降解相比，酶降解多環(huán)芳烴的速度更快，即使在復(fù)雜的土壤環(huán)境條件下也能對(duì)多環(huán)芳烴有很好的降解效果。因而，利用酶對(duì)多環(huán)芳烴污染場地土壤的修復(fù)被認(rèn)為是整個(gè)生物修復(fù)中最具潛力的修復(fù)方法。當(dāng)前研究大多集中于對(duì)白腐真菌粗酶液中漆酶進(jìn)行分離純化，經(jīng)分級(jí)沉淀、層析純化后的純漆酶應(yīng)用于多環(huán)芳烴降解，但純化后的酶制劑成本普遍偏高，而且不論是酶制劑，還是粗酶液在實(shí)際應(yīng)用過程中對(duì)土壤環(huán)境中多環(huán)芳烴的降解效果都不理想。

發(fā)明內(nèi)容

為了能夠用于實(shí)際土壤修復(fù)并達(dá)到理想的多環(huán)芳烴的降解效果，本發(fā)明提供一種降解土壤中復(fù)合多環(huán)芳烴的固載型粗酶。

本發(fā)明降解土壤中復(fù)合多環(huán)芳烴的固載型粗酶由酸改性的板栗內(nèi)殼和白腐真菌的粗酶液制成；白腐真菌的粗酶液中包括銅離子溶液。

進(jìn)一步的，所述白腐真菌的粗酶液中銅離子的濃度是1mM～2mM。

進(jìn)一步的，所述白腐真菌的粗酶液還包括乙腈、Tween?80和介體；其中，介體為HBT和紫脲酸，粗酶液中HBT的濃度是0.1mM～0.5mM，粗酶液中紫脲酸的濃度是0.5mM～1mM；粗酶液中乙腈的濃度是10％；粗酶液中Tween?80的濃度是1％。

本實(shí)施方式中乙腈作為助溶劑加入白腐真菌的粗酶液，Tween?80作為分散劑加入白腐真菌的粗酶液。

進(jìn)一步的，所述白腐真菌的粗酶液中漆酶活性為10U/mL。

進(jìn)一步的，所述白腐真菌的粗酶液的pH值為自然pH。

進(jìn)一步的，所述白腐真菌的粗酶液由Coriolus?versicolo菌株放入液體培養(yǎng)基然后置于25℃～31℃、120r/min-160r/min條件下培養(yǎng)12～18天，然后9000r/min～11000r/min離心10min，分離得到上清液，然后稀釋制成；其中，1L液體培養(yǎng)基由15.00g～30.00g麩皮、0.40g～0.50g?NH₄Cl、0.20g?KH₂PO₄、0.05g?MgSO₄·7H₂O、0.01g?CaCl₂、1.00g吐溫80、無機(jī)溶液1.00mL和余量的蒸餾水制成。

本實(shí)施方式中液體培養(yǎng)基自然pH。