[發(fā)明專利]用于煙草缺鋅營養(yǎng)診斷的基因標志物集及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210773990.7
• 申請日: 2022-07-01
• 公開（公告）號: CN116004877A
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設計）人: 李文卿;陳松彪;唐唯其;曲夢宇;郭金平;陸建軍;柯玉琴;李春英;謝榕榕;梁廷敏;葉蓉蓉;遲文超;王月敏;高靜娟;朱晨宇
• 申請（專利權）人: 福建省煙草專賣局煙草科學研究所;閩江學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學俊

1.一種用于煙草缺鋅營養(yǎng)診斷的基因標志物集，其特征在于：所述基因標志物集由Nitab4.5_0000143g0340、Nitab4.5_0000572g0110、Nitab4.5_0003605g0060、Nitab4.5_0001724g0060、Nitab4.5_0006169g0020組成，Nitab4.5_0000143g0340的核苷酸序列如SEQID?NO:1所示，Nitab4.5_0000572g0110的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示，Nitab4.5_0003605g0060的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示，Nitab4.5_0001724g0060的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示，Nitab4.5_0006169g0020的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5所示。

2.如權利要求1所述的基因標志物集在煙草缺鋅營養(yǎng)診斷中的應用。

3.一種煙草缺鋅營養(yǎng)診斷試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括通過RT-qPCR技術檢測權利要求1所述的基因標志物集的試劑。

4.根據(jù)權利要求3所述的煙草缺鋅營養(yǎng)診斷試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括特異性檢測Nitab4.5_0000143g0340、Nitab4.5_0000572g0110、Nitab4.5_0003605g0060、Nitab4.5_0001724g0060、Nitab4.5_0006169g0020的引物。

5.根據(jù)權利要求4所述的煙草缺鋅營養(yǎng)診斷試劑盒，其特征在于：所述特異性檢測Nitab4.5_0000143g0340、Nitab4.5_0000572g0110、Nitab4.5_0003605g0060、Nitab4.5_0001724g0060、Nitab4.5_0006169g0020的引物的序列如下：

Nitab4.5_0000143g0340的特異性引物：

RT-0143-F:?5?-CGGCTTGTTACACCTCATTACTC-3?，

RT-0143-R:?5?-TTCACCACTTGCTTCAACTCTTC-3?；

Nitab4.5_0000572g0110的特異性引物：

RT-0572-F:?5?-GATAGACCTCTTGCTTCC-3?，

RT-0572-R:?5?-GATTAGTTGCTTGTGATGG-3?；

Nitab4.5_0003605g0060的特異性引物：

RT-3605-F:?5?-TTCAGCAAGAGTAATTGTTG-3?，

RT-3605-R:?5?-?ATTCGGAAGTTCGTCAAG-3?；

Nitab4.5_0001724g0060的特異性引物：

RT-1724-F:?5?-GCTTCAGTCATTCCTTAG-3?，

RT-1724-R:?5?-TGCTGTCAATATCATCCT-3?；

Nitab4.5_0006169g0020的特異性引物：

RT-6169-F:?5?-TCTCACTTACAACTCCAG-3?，

RT-6169-R:?5?-?AATACTCCTTCCACAATGA-3?。

6.如權利要求3所述的煙草缺鋅營養(yǎng)診斷試劑盒在煙草缺鋅營養(yǎng)診斷中的應用。

7.一種煙草缺鋅營養(yǎng)診斷的方法，其特征在于：包括如下步驟：

1）采集待測煙草葉片，提取總RNA，反轉錄成cDNA；

2）以反轉錄得到的cDNA為模板，利用權利要求5中所述的特異性引物進行RT-qPCR檢測，根據(jù)基因是否上調表達判斷待測煙草是否處于缺鋅脅迫。

8.根據(jù)權利要求7所述的煙草缺鋅營養(yǎng)診斷的方法，其特征在于：若待測煙草中Nitab4.5_0000143g0340、Nitab4.5_0000572g0110、Nitab4.5_0003605g0060、Nitab4.5_0001724g0060、Nitab4.5_0006169g0020的表達較正常煙草顯著上調，則該待測煙草處于缺鋅脅迫狀態(tài)。