[發明專利]貼合臨床現狀的老年膿毒癥血小板減少小鼠模型構建方法

在審

• 申請號: 202210765830.8
• 申請日: 2022-07-01
• 公開（公告）號: CN115005162A
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 許華;高紅梅;王兵;宋文靜;王遲娟;王勇強
• 申請（專利權）人: 天津市第一中心醫院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 北京萬貝專利代理事務所(特殊普通合伙) 11520
• 代理人: 代亞欣

貼合臨床現狀的老年膿毒癥血小板減少小鼠模型構建方法，它涉及醫療檢測技術領域。它包括以下具體步驟：選取小鼠；飼養；單次尾靜脈注射內毒素；對照組尾靜脈注射同等體積生理鹽水；觀察與檢測；檢測與分析。本發明有益效果為：以20月齡C57BL/6J小鼠為模型制備對象，采用內毒素尾靜脈注射方法，構建貼合臨床現狀的老年膿毒癥血小板減少小鼠模型構建方法老年膿毒癥血小板減少小鼠模型，為膿毒癥血小板減少的發病機制及藥物治療研究提供更加貼合臨床實際的膿毒癥血小板減少模型，老年小鼠造模在機體年齡和各項機能方面更加接近臨床膿毒癥患者的年齡特點，使用靜脈注射內毒素，干擾因素少，模型穩定性強。

技術領域

本發明涉及醫療檢測技術領域，具體涉及貼合臨床現狀的老年膿毒癥血小板減少小鼠模型構建方法。

背景技術

為更好的研究膿毒癥的發病機制及尋找預防治療方法，研究人員已有多種構建膿毒癥模型的方法，如：盲腸結扎穿孔法、自身排泄物腹腔移植法、細菌攻擊法(腹腔、靜脈或氣管肺部注射)和內毒素攻擊法(腹腔、靜脈注射)等，以期復制模擬臨床膿毒癥患者的發病過程。其中盲腸結扎穿孔法制備的膿毒癥模型在眾多模型中認可度較高，但該方法在構建過程中存在較多影響因素，盲腸結扎位置、穿孔大小、力度等均存在不可控因素，因此，模型的穩定性和可重復性較差。且目前的動物模型制備多采用低齡動物，特別是用嚙齒類低齡大鼠、小鼠制備膿毒癥模型，所制備鼠類膿毒癥模型自愈能力較強，無法貼合臨床實際。此外，目前所制備的膿毒癥模型較少涉及膿毒癥血小板減少情況的模擬。因此，需要構建更加貼合臨床實際的動物模型，來復現膿毒癥血小板減少的臨床特征及發病過程。

C57BL/6J是目前應用最廣泛的近交系小鼠和首個完成全基因組測序的小鼠，小鼠與人類壽命對比研究顯示18-24月齡小鼠相當于人類56-69歲，且目前老年C57BL/6J小鼠已應用于免疫學、癌癥、長壽干預和生物標志物等相關研究中。

現有技術中，所用造模小鼠均為年輕健康小鼠，本身對內毒素等造模誘導因素抵抗力強，自愈能力強，不能很好的模擬膿毒癥的發病過程，且盲腸結扎穿孔術干擾因素較多，模型制備穩定性和可重復性較差。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術中不足與缺陷，提供貼合臨床現狀的老年膿毒癥血小板減少小鼠模型構建方法，以20月齡C57BL/6J小鼠為模型制備對象，采用內毒素尾靜脈注射方法，構建一種老年膿毒癥血小板減少小鼠模型，為膿毒癥血小板減少的發病機制及藥物治療研究提供更加貼合臨床實際的膿毒癥血小板減少模型，老年小鼠造模在機體年齡和各項機能方面更加接近臨床膿毒癥患者的年齡特點，使用靜脈注射內毒素，干擾因素少，模型穩定性強。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案是：貼合臨床現狀的老年膿毒癥血小板減少小鼠模型構建方法，它包括以下具體步驟：選取小鼠：采用20月齡C57BL/6J小鼠，體重30～35g；飼養：所述在選取完后應當適應性飼養1周；單次尾靜脈注射內毒素：稱量小鼠體重，按15mg/kg劑量給予模型組小鼠尾靜脈注射內毒素，對照組小鼠按體重注射等體積生理鹽水；對照組尾靜脈注射生理鹽水：生理鹽水注射量應當與內毒素注射量相等；觀察與檢測：注射前、注射12h、24h、48h和72h目內眥取血檢測小鼠血小板減少計數評估血小板減少情況，連續72h觀察小鼠生存狀態(小鼠毛發是否光澤，活動量是否正常，對外界刺激的反應速度，飲食飲水、排便情況，眼部有無充血、粘連、潰爛等情況，小鼠的死亡情況)，72h后取血分離血清，處理小鼠后分離小鼠肺臟組織，生理鹽水沖洗干凈并放入4％多聚甲醛固定保存；檢測與分析：檢測小鼠外周血血小板計數，酶聯免疫吸附法檢測血清中TNF-α、IL-1β和IL-18炎癥因子表達，肺臟組織病理分析觀察肺臟損傷情況，免疫組織化學法觀察肺組織中血小板的扣押情況。

采用上述技術方案后，本發明有益效果為：以20月齡C57BL/6J小鼠為模型制備對象，采用內毒素尾靜脈注射方法，構建一種老年膿毒癥血小板減少小鼠模型，為膿毒癥血小板減少的發病機制及藥物治療研究提供更加貼合臨床實際的膿毒癥血小板減少模型，老年小鼠造模在機體年齡和各項機能方面更加接近臨床膿毒癥患者的年齡特點，使用靜脈注射內毒素，干擾因素少，模型穩定性強。